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更新時(shí)間:2023-04-27 20:54:15瀏覽次數(shù):366

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)
*0F`感受態(tài) 公司新聞

詳細(xì)介紹

*0F`:                                                     100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質(zhì)期):                            -80℃(6個(gè)月)

 

基因型

F´{lacIq Tn10 (TetR)} mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galgalrpsendA1 nup

 

 

 

 

產(chǎn)品說(shuō)明

*0F`菌株來(lái)源于*0菌株。將F`{lacIq Tn10 (TetR)}因子轉(zhuǎn)入*0菌株,即為*0F`。該F`因子攜帶lacIq 抑制子,可抑制trc,tac,lac等啟動(dòng)子下游基因的表達(dá),從而可以用于一些表達(dá)毒性蛋白質(zhì)粒的擴(kuò)繁。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。可用于構(gòu)建克隆,藍(lán)白斑篩選(如用于藍(lán)白斑篩選,需在培養(yǎng)基中加入IPTG誘導(dǎo)的表達(dá))實(shí)驗(yàn),具有四環(huán)素抗性。*0F`感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>10cfu/μg DNA。

 

操作方法

 

1. *0F`感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA (質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物并用手撥EP管底輕輕混勻,冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YTLB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YTLB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少13 h。

 

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?;蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

 

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