*0感受態(tài) 技術新聞

OP10：                                                     100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期)：                            -80℃（6個月） 

基因型

F^- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (Str^R) endA1 nupG 

產(chǎn)品說明

*0菌株來源于MC1061菌株，是目前實驗室常用的感受態(tài)細胞之一，基因型與DH10B高度類似 (DH10B為galE15型，而*0為galU型)。*0生長速度快 (比DH5α快，但比Mach1-T1生長速度慢)，10小時可見克隆，recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質粒DNA的提取?？捎糜跇嫿寺?，藍白斑篩選等實驗。*0感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>5×10⁸cfu/μg DNA。 

操作方法

1. *0感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質?；蜻B接產(chǎn)物) 并用手打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少13 h。

注意事項

1. 感受態(tài)細好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質?；蜻B接產(chǎn)物時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應減少終用于涂板的菌量。