TG1感受態(tài) 技術(shù)新聞

TG1：                                                         100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                            -80℃（6個月） 

基因型

[F´traD36 proAB lacI^qZΔM15] supE thi-1Δ(lac-proAB)Δ(mcrB-hsdSM)5(r_K^–m_K^–)

產(chǎn)品說明

TG1來源于E. coli K-12菌株，是目前生長速度快的克隆用大腸桿菌菌株，在平板上37℃，7 h可見克隆。主要的噬菌體展示用菌株，同時也可用于普通質(zhì)粒的構(gòu)建，lacIqZΔM15的存在使其可以用于藍(lán)白斑篩選等實驗；但不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時推薦使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液以去除菌體內(nèi)大量的核酸酶。TG1感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>10⁹cfu/μg DNA。 

操作方法

1. TG1感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)粒或連接產(chǎn)物) 并用手打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項

1. 感受態(tài)細(xì)胞好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。