Ar.A4感受態(tài)

Ar.A4：                                                                      100μl/支
pK7WGF2（control vector，10ng/μl )                            10μl
保存條件(保質(zhì)期)：                                         -80℃（12個月）

基因型

Agrobacterium rhizogenes(kan^R  ) Ar A4 Ri(agropine  type)

產(chǎn)品說明

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌，它能夠感

染 大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物。Ar.A4發(fā)根農(nóng)桿菌菌株含有農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒，

具有廣泛的宿主范圍（玉米，煙草，胡蘿卜，甘草等），同時具有卡那霉素抗性。本公司生產(chǎn)的Ar.A4化

學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pK7WGF2質(zhì)粒（壯觀霉素抗性）檢測，轉(zhuǎn)化效率>10⁴ cfu/μg DNA。

常規(guī)操作方法

1.取-80℃保存的Ar A4發(fā)根農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。

2.每100μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA（轉(zhuǎn)化效率較高，一次使用前好做預(yù)實驗確定所加質(zhì)粒的量）

，用手快速、劇烈打管底混勻或用槍吹吸混勻，依次放于冰中靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、

冰浴5分鐘。

3. 冰浴中拿出放室溫，加入700μl 無抗生素的TY 液體培養(yǎng)基，于 28℃振蕩培養(yǎng) 2小時。

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 TY平板上，

倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2-3 天

● 農(nóng)桿菌相關(guān)抗生素配方：

常用農(nóng)桿菌抗性： (R：抗；S：敏感。)

● TY配方（1L）：

Tryptone                5g

Yeast extract          3g

補水到1L體積，*溶解后，121度、20分鐘高溫滅菌

配制1M的氯化鈣水溶液，121度、20分鐘高溫滅菌

每1L 滅菌的TY液體營養(yǎng)液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可。

若配制TY固體培養(yǎng)基，則加入15g 瓊脂粉。

注意事項

1. 加入質(zhì)粒時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉(zhuǎn)

化效率急劇下降；質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。

2. 混勻質(zhì)粒時應(yīng)用手指快速打管底或用槍吹吸混勻，務(wù)必使質(zhì)?？焖?、均勻分散開，

與感受態(tài)細胞充分接觸。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。

3. 平板上陽性克隆密度過大時，由于營養(yǎng)不足，陽性克隆生長變慢，菌落變小，為了獲

得大的菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量或降低涂板的菌量。

4. Ar.A4具有卡那霉素抗性，不可用于具有卡那霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。