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Ar.A4感受態(tài)

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更新時(shí)間:2023-04-28 07:44:48瀏覽次數(shù):801

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)
Ar.A4感受態(tài)

詳細(xì)介紹

Ar.A4:                                                                      100μl/支
pK7WGF2(control vector,10ng/μl )                            10μl
保存條件(保質(zhì)期):                                         -80℃(12個(gè)月)

 

基因型

Agrobacterium rhizogenes(kanR  ) Ar A4 Ri(agropine  type)

 

 

 

 

產(chǎn)品說明

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌,它能夠感

 大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個(gè)別裸子植物。Ar.A4發(fā)根農(nóng)桿菌菌株含有農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒,

有廣泛的宿主范圍(玉米,煙草,胡蘿卜,甘草等),同時(shí)具有卡那霉素抗性。本公司生產(chǎn)的Ar.A4化

學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pK7WGF2質(zhì)粒(壯觀霉素抗性)檢測(cè),轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。

 

常規(guī)操作方法

1.取-80℃保存的Ar A4發(fā)根農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰中。

2.每100μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA(轉(zhuǎn)化效率較高,一次使用前好做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量)

,用手快速、劇烈打管底混勻或用槍吹吸混勻,依次放于冰中靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、

冰浴5分鐘。

 

3. 冰浴中拿出放室溫,加入700μl 無抗生素的TY 液體培養(yǎng)基,于 28℃振蕩培養(yǎng) 2小時(shí)。

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 TY平板上,

倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2-3 天

 

 

● 農(nóng)桿菌相關(guān)抗生素配方:

 

  抗生素

  配方

  原液

  工作液

  羧芐青霉素 (carb)

  雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

 50 mg/ml

 50 μg/ml

  硫酸卡那霉素 (kan)

  雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

 50 mg/ml

 50 μg/ml

  鏈霉素 (strep)

  雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

 10 mg/ml

 50 μg/ml

  利福平 (rif)

 DMSO溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

 10 mg/ml

 20 μg/ml

  慶大霉素 (gent)

  雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌 

 20 mg/ml

 40 μg/ml

  氯霉素(cam

  無水乙醇溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

 34 mg/ml

 34 ug/ml

 

 

常用農(nóng)桿菌抗性: (R:抗;S:敏感。)

 

農(nóng)桿菌菌株

羧芐青霉素(carb)

鏈霉素(strep)

利福平(rif)

氯霉素(cam)

硫酸卡那霉素(kan)

Ar.A4

S

S

S

S

R

MSU440

S

R

S

S

S

Ar.Qual

S

R

S

R

S

C58C1

S

R

R

S

S

ATCC15834

S

S

S

S

S

K599

S

R

S

S

S

Ar.1193

R

R

R

S

S

 

 

● TY配方(1L):

Tryptone                5g

Yeast extract          3g

補(bǔ)水到1L體積,*溶解后,121度、20分鐘高溫滅菌

配制1M的氯化鈣水溶液,121度、20分鐘高溫滅菌

每1L 滅菌的TY液體營養(yǎng)液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可。

若配制TY固體培養(yǎng)基,則加入15g 瓊脂粉。

 

注意事項(xiàng)

 

1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10;質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染,轉(zhuǎn)

化效率急劇下降;質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。

2. 混勻質(zhì)粒時(shí)應(yīng)用手指快速打管底或用槍吹吸混勻,務(wù)必使質(zhì)??焖佟⒕鶆蚍稚㈤_,

與感受態(tài)細(xì)胞充分接觸。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。

3. 平板上陽性克隆密度過大時(shí),由于營養(yǎng)不足,陽性克隆生長變慢,菌落變小,為了獲

得大的菌落,應(yīng)減少質(zhì)粒用量或降低涂板的菌量。

4. Ar.A4具有卡那霉素抗性,不可用于具有卡那霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。

 

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