Ar.1193 Electro感受態(tài)

Ar.1193 Electro：                                                         50μl/支
pCAMBIA2301（control vector，10ng/μl )：                 10μl
保存條件(保質(zhì)期)：                                          -80℃（12個月）

基因型

Agrobacterium rhizogenes (carb ^R,str^R,lif^R ) pRi1193 (agropine type)

產(chǎn)品說明

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌，它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物。Ar.1193發(fā)根農(nóng)桿菌含有pRi1193農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒，特別適合豆科，茄科植物毛狀根的誘導(dǎo)，同時具有羧芐青霉素，鏈霉素，利福平抗性。唯地生物開發(fā)的Ar.1193電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化，感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pCAMBIA2301質(zhì)粒（卡那霉素抗性）檢測，轉(zhuǎn)化效率>10⁵ cfu/μg DNA；經(jīng)pCAMBIA2301-ZH質(zhì)粒（size:40 kb）檢測轉(zhuǎn)化效率可達5×10³ cfu/μg DNA。

常規(guī)操作方法

1. 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。

2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘，待其融化，加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA（體積不大于6ul，用試劑盒抽提，雙蒸水溶解；轉(zhuǎn)化效率較高，次使用前好做預(yù)實驗確定所加質(zhì)粒的量），打管底混勻，立即插入冰中，用200 μl槍頭將感受態(tài)-質(zhì)粒混合物快速移到電擊杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用。

3. 啟動電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此參數(shù)為Biorad 推薦，使用者也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的protocol操作），將電擊杯從冰中拿出，吸水紙吸干外表面水份，快速放入電轉(zhuǎn)槽中，啟動電擊，電擊完成快速插入冰中，加入1 ml無抗生素的TY，并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中，28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。

4. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的TY平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天