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詳細(xì)介紹
細(xì)胞背景
來源于 C57BL/6J 小鼠的原發(fā)性肝細(xì)胞癌。這些小鼠肝細(xì)胞忠實(shí)地代表了肝細(xì)胞癌，并為研究這種類型的肝癌提供了有價(jià)值的模型。同義詞 HEP-53.4 和 53.4，它們便于識(shí)別和交叉引用。肝細(xì)胞癌是一個(gè)重大的健康問題，這些細(xì)胞能夠?qū)ζ浞肿油贰⒓?xì)胞相互作用和治療策略進(jìn)行精確研究。這些細(xì)胞起源于 Mus musculus（小鼠），為理解和開發(fā)肝細(xì)胞癌的治療方法提供了相關(guān)的模型系統(tǒng)。
細(xì)胞特性
形態(tài)：上皮樣細(xì)胞 貼壁生長.
用途：僅供科研使用。
培養(yǎng)條件：
1）準(zhǔn)備 DMEM（含 NaHCO3 1.5g/L）+FBS 10% + P/S 1 %
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%
注意:該細(xì)胞在 DMEM(含 1.5g/LNaHCO3)培養(yǎng)基中生長良好，大部分品牌的 DMEM 含有較高濃度的 NaHCO3（3.7g/L），若使用 DMEM（3.7g/L NaHCO3）培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要提高 CO2 濃度（7%-10%）。
1.常規(guī)消化收集細(xì)胞離心 2.離心后去掉離心管內(nèi)上清，加入 1ml 左右ym重懸細(xì)胞混勻，建議輕輕晃動(dòng)或者輕輕吹打細(xì)胞， 放入培養(yǎng)箱消化細(xì)胞，再消化 1min 左右。 3. 消化好后，用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞團(tuán)分散，迅速加入 3-5ml 含血清的培養(yǎng)基混勻以終止消化，離心去除ym 4. 加入 5ml 左右的細(xì)胞相應(yīng)的培養(yǎng)基混勻，按比例接入培養(yǎng)瓶/皿中 5.顯微鏡下觀察看細(xì)胞是否成均勻分散的單細(xì)胞，若有少量成團(tuán)的小細(xì)胞團(tuán)可不用重新消化，使之貼壁后待細(xì)胞生長穩(wěn)定后再消散細(xì)胞。
貼壁細(xì)胞參考：
一.消毒靜置等細(xì)胞穩(wěn)定后拍照 100X 和 200X。棄去培養(yǎng)上清，用 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次并吸走。
二. T25 瓶加入 0.25％EDTA ydbm 1-2ml 于培養(yǎng)瓶中震蕩混勻，如果屬于貼壁不牢固的細(xì)胞很容易脫落的就培養(yǎng)箱外面消化震蕩待脫落 90%以上終止消化，一般小于 1 分鐘以內(nèi)，甚至不加ym有部分貼壁非常不牢固的細(xì)胞也會(huì)自然震蕩脫落。如果是貼壁牢固的細(xì)胞則置于 37℃培養(yǎng)箱中消化提高效率，每 40-50 秒拿出培養(yǎng)箱震蕩幫助細(xì)胞脫落，如脫落 90%以上則對(duì)應(yīng) 3-6ml 含有 10%血清的培養(yǎng)基終止，以防ym殘留損傷細(xì)胞。如
果貼壁非常牢固的細(xì)胞，脫落的比例比較低，也不超過 2 分鐘后終止消化，再加入 1ml 培養(yǎng)基讓細(xì)胞緩沖后再過 2 分鐘進(jìn)行二次消化，反復(fù)分步消化以降低單次消化時(shí)長，減少刺激，保護(hù)細(xì)胞膜?；虿捎霉萎a(chǎn)刮細(xì)胞的方式處理也可以?？倸w原則是達(dá)到消化目的的同時(shí)減少細(xì)胞膜受到的損傷越小越好。
三.消化完成后輕輕吹勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶/6cm 培養(yǎng)皿中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按 1:2 和以上比例進(jìn)行，具體以實(shí)際細(xì)胞密度決定。期間多的細(xì)胞一定保存多份細(xì)胞凍存管備種
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