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上海語純生物科技有限公司>>細(xì)胞>>CC96194BL21感受態(tài)

BL21感受態(tài)

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  • BL21感受態(tài)

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  • 型號 CC96194
  • 品牌 其他品牌
  • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
  • 所在地 上海市

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更新時間:2024-10-31 08:56:06瀏覽次數(shù):54

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產(chǎn)品簡介

BL21是最早開發(fā)的用于原核表達(dá)的菌株,BL21(DE3)、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表達(dá)菌株均來源于BL21菌株。該菌株主要用于非毒性蛋白的表達(dá),不含T7 RNA聚合酶,所以不能用于由T7啟動子驅(qū)動的蛋白表達(dá)(如:pET系列);但含有大腸桿菌RNA聚合酶,適合依賴于大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統(tǒng)的表達(dá)(如:pGEX,pMAL質(zhì)粒)。其中ompT可減少外膜蛋白酶的表達(dá)

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品概述

產(chǎn)品描述

BL21是最早開發(fā)的用于原核表達(dá)的菌株,BL21(DE3)Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表達(dá)菌株均來源于BL21菌株。該菌株主要用于非毒性蛋白的表達(dá),不含T7 RNA聚合酶,所以不能用于由T7啟動子驅(qū)動的蛋白表達(dá)(如:pET系列);但含有大腸桿菌RNA聚合酶,適合依賴于大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統(tǒng)的表達(dá)(如:pGEX,pMAL質(zhì)粒)。其中ompT可減少外膜蛋白酶的表達(dá)量,從而減少重組蛋白的水解,提高表達(dá)產(chǎn)量;hsd基因變異可致菌株細(xì)胞內(nèi)的I型限制酶EcoKEcoB活性缺失,從而提高PCR產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化效率。BL21感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)107 cfu/μg DNA。

產(chǎn)品優(yōu)勢

? 高轉(zhuǎn)化效率:>1x107 cfu/µg pUC19 DNA
? 適合依賴于大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統(tǒng)的表達(dá)

產(chǎn)品組分

組分

CC96194-01

CC96194-02

BL21感受態(tài)細(xì)胞

10 × 100 μL

100 × 100 μL




基因型:E. coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal [malB+]K-12(λS)

 

產(chǎn)品應(yīng)用

BL21感受態(tài)細(xì)胞適用于依賴于大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統(tǒng)的表達(dá)(如:pGEX,pMAL質(zhì)粒)。

實驗流程

1. 解凍感受態(tài)細(xì)胞:從-80 ℃取感受態(tài)細(xì)胞,放置在冰浴或冰水浴中融化,約5-10 min,放置時間過長會影響轉(zhuǎn)化效率。

2. DNA樣品的轉(zhuǎn)化:每100 μL感受態(tài)加入待轉(zhuǎn)化DNA樣品(例如質(zhì)粒、連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物等)10 μL,然后輕輕彈擊管底約2-3次,立即冰上靜置孵育30 min。

? 加入待轉(zhuǎn)化DNA樣品體積通常不宜超過感受態(tài)細(xì)胞體積的10%。
? 加入待轉(zhuǎn)化DNA樣品后應(yīng)輕柔操作,避免使用移液槍吹打混勻。
? 如果用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化擴增,冰浴靜置約10 min后可以直接涂板并培養(yǎng)過夜;如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化,建議冰浴靜置30分鐘并嚴(yán)格執(zhí)行后續(xù)的熱激處理和復(fù)蘇培養(yǎng)等步驟,以提高轉(zhuǎn)化效率。

3. 熱激處理:將冰浴后的離心管快速置于42℃水浴中,靜置熱激90 s。隨后立即轉(zhuǎn)移至冰水浴中靜置2-3 min以快速冷卻。

? 熱激及轉(zhuǎn)移至冰浴過程中請勿晃動離心管。

4. 復(fù)蘇培養(yǎng):加入900 μL 37℃預(yù)熱的LBSOC培養(yǎng)基,顛倒數(shù)次混勻,37℃搖床約220 rpm復(fù)蘇培養(yǎng)45 min。

5. 收菌涂板:如果用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化擴增,建議直接取50-100 μL進(jìn)行涂板即可;如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化,建議先5000 g,1 min室溫離心沉淀細(xì)菌,吸除約900-950 μL上清,然后用剩余的約50-100 μL菌液重懸,涂布到含相應(yīng)抗生素的LB平板上。

6. 過夜培養(yǎng):將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。

? 培養(yǎng)前需要將平板在超凈臺中稍微晾至無明顯水漬,有利于形成單克隆。

保存條件

-80℃保存;請勿將本品置于-20℃或者液氮中保存。

相關(guān)參數(shù)

感受態(tài)類型

化學(xué)感受態(tài)

感受態(tài)菌株名稱

BL21

種屬

大腸桿菌

轉(zhuǎn)化效率

高效率 (>1x10^7 cfu/µg pUC19 DNA)

菌株用途

表達(dá)

應(yīng)用特征

適用于依賴于大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統(tǒng)的表達(dá)

是否可進(jìn)行藍(lán)白斑篩選

菌株抗性

-

培養(yǎng)基

LB

培養(yǎng)條件

37℃,有氧

誘導(dǎo)方法

-

保存條件

-80

運輸條件

干冰

包裝規(guī)格

管裝 (100 µL/)


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