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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡介
Tuner 系列菌株是 lacZY 刪除的 BL21 突變菌株，其中 lacY 的突變使得 IPTG 能夠進(jìn)入所有細(xì)胞的胞
內(nèi)，從而使得蛋白的誘導(dǎo)水平具有 IPTG 的濃度依賴性。當(dāng)與 pET 系列載體聯(lián)合使用時，可使蛋白
的表達(dá)量從低表達(dá)水平到超高表達(dá)水平的范圍內(nèi)進(jìn)行有效的調(diào)節(jié)；而在蛋白表達(dá)水平低的情況下，
目的蛋白可能會呈現(xiàn)更好的可溶性和活性。因此，Tuner系列菌株的蛋白表達(dá)水平可以通過IPTG濃
度來進(jìn)行精確而嚴(yán)謹(jǐn)?shù)恼{(diào)控。此外，Tuner 系列菌株還是 Lon 和 OmpT 蛋白酶缺陷型菌株。由于該
菌株不含有 λDE3序列，不表達(dá) T7 RNA 聚合酶，因此不能用于 T7啟動子系列質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。經(jīng)
pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測，Tuner 感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
Tuner
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm lacY1
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔
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