化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
產(chǎn)品簡介
Rosetta-gami B 系列菌株來源于 Origami B 系列菌株，是集合了 BL21 系列、Rosetta 系列和 Origami
系列菌株的優(yōu)點。菌株含有 pLacIRARE 質粒，能夠提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有的 AUA, AGG,
AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六個稀有密碼子的 tRNA，提高了真核細胞蛋白在大腸桿菌中的表達水
平。在 thioredoxin reductase (trxB)和 glutathione reductase (gor)基因上同時含有突變，這使得該菌株
能夠更加高效地在細胞質內生成二硫鍵，有助于表達含二硫鍵的活性蛋白。菌株帶有氯m素、卡
那和四環(huán)素抗性，無法用于轉化含這些抗性的質粒。Rosetta-gami B(DE3)系列菌株含有溶源的
λDE3，可以表達 T7 RNA 聚合酶，適用于 pET 系列載體及其他 T7 啟動子系列載體。此外，
pLacIRARE 質粒能夠額外表達 lac 轉錄抑制蛋白，從而抑制了 lac 啟動子的本底表達水平。
pLacIRARE 質粒的起始復制位點是 p15 Origin, 這使得該質粒能夠和 pUC-及 pBR322-衍生的質?；?/span>
相共存。經(jīng) pUC18 質粒轉化檢測，Rosetta-gami B(DE3)感受態(tài)細胞的轉化效率可達 107 cfu/μg DNA
以上。
產(chǎn)品組成
組分
Rosetta-gami B (DE3) pLacI
化學感受態(tài)細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pLacIRARE (CamR, KanR, TetR)
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除 pLacIRARE 質粒外，無外源質粒 DNA 殘留；
化學法轉化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預熱），后置于 37 ℃搖床復壯 45 min；
5. 取不同體積的轉化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰水浴中解凍后應立即使用；
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態(tài)細胞體積的 1/10；
3. 加入待轉化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
化工儀器網(wǎng)