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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Origami 系列菌株是大腸桿菌 K12 的衍生菌，在 trxB 和 gor 基因上同時(shí)含有突變，這使得該菌株能
夠更加高效地在胞內(nèi)生成二硫鍵，有助于表達(dá)含二硫鍵的活性蛋白。該菌株含有 λDE3 序列，由
lacUV5 啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng) T7 RNA 聚合酶的表達(dá)。Origami 系列菌株的感受態(tài)細(xì)胞具有卡那m素和四環(huán)s
抗性，能夠用于氨芐抗性質(zhì)粒的蛋白表達(dá)，尤其是和 pET32a 載體能夠好搭配使用。pET32a 載體
含有 thioredoxin (TRX)融合標(biāo)簽，能夠高效提升胞質(zhì)內(nèi)蛋白二硫鍵的形成。Origami 感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)
特殊工藝制作，經(jīng) pUC18 質(zhì)粒檢測(cè)，其轉(zhuǎn)化效率>108 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
Origami (DE3)
感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsLF [lac+ lacIq pro]
λ(DE3) gor522::Tn10 gorB (KanR, TetR)
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），然后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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