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詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Origami B系列菌株同樣具有Origami系列菌株含有的trxB/gor基因突變，但是該菌株是來(lái)源于BL21
的 lacZY 基因突變株。所以 Origami B 系列感受態(tài)細(xì)胞是集合 BL21，Tuner 和 Origami 三種細(xì)胞株
的優(yōu)點(diǎn)于一身。在 thioredoxin reductase (trxB)和 glutathione reductase (gor)基因上同時(shí)含有突變，這
使得該菌株能夠更加高效的在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)生成二硫鍵，有助于含二硫鍵蛋白的活性蛋白形成。TrxB
和 Gor 基因突變使得質(zhì)粒能夠分別具有卡那和四環(huán)素抗性，所以本菌株無(wú)法用于卡那和四環(huán)素抗性
質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。Origami B 感受態(tài)細(xì)胞來(lái)源于含有 lacZY 基因突變的 BL21 菌株，能夠通過(guò) IPTG
高效控制目的基因的表達(dá)。經(jīng) PUC18 質(zhì)粒檢測(cè)，感受態(tài)細(xì)胞的效率可達(dá) 108 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
Origami B 感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm lacY1 ahpC gor522:: Tn10 trxB (KanR , TetR)
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），然后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過(guò)程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。
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