化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
K12 消除了 F 和 lambda 的一種野生型菌株，可作為大腸桿菌模式菌株使用。經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉化檢
測，W3110 感受 態(tài)細胞的轉化效率可達 108 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
W3110 感受態(tài)細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- lambda- IN(rrnD-rrnE)1 rph-1
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學法轉化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉化 DNA 加入到 100μL 感受態(tài)細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預熱），然后置于 37 ℃搖床復壯 45 min；
5. 取不同體積的轉化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰水浴中解凍后應立即使用；
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態(tài)細胞體積的 1/10；
3. 加入待轉化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔
化工儀器網(wǎng)