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陽(yáng)離子脂質(zhì)/低聚物復(fù)合物的制備程序

時(shí)間：2024/1/15閱讀：571
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基本原理

制備脂質(zhì)：DNA 復(fù)合物的正常程序需要將陽(yáng)離子脂質(zhì)懸浮在水性緩沖液中并超聲處理以形成小囊泡。將陽(yáng)離子脂質(zhì)囊泡與DNA水溶液以脂質(zhì):DNA 10:1的重量比混合，并孵育一段時(shí)間。在此溫育過(guò)程中，推測(cè)帶正電荷的脂質(zhì)體結(jié)合并包覆在 DNA 表面，為 DNA 提供陽(yáng)離子脂質(zhì)層，從而促進(jìn)與細(xì)胞膜的相互作用并通過(guò)細(xì)胞膜轉(zhuǎn)移。對(duì)于小 DNA 片段或寡聚體，例如反義 DNA，DNA 顆粒通常比脂質(zhì)顆粒小得多。在這種情況下，脂質(zhì)不包被DNA，而是DNA包被脂質(zhì)體的表面。這將破壞關(guān)鍵的脂質(zhì)體：細(xì)胞表面相互作用并抑制通過(guò)膜的轉(zhuǎn)移。為了有效地包被這些小 DNA 顆粒，脂質(zhì)需要以單體（或小聚集體）的形式呈現(xiàn)給 DNA。這可以通過(guò)將脂質(zhì)溶解在有機(jī)溶劑中并將有機(jī)物分散在DNA水溶液中或?qū)⒅|(zhì)和DNA一起在有機(jī)溶劑中孵育來(lái)實(shí)現(xiàn)。選擇的溶劑是乙醇，因?yàn)樗扰c水混溶，又在懸浮液中殘留溶劑時(shí)對(duì)生物系統(tǒng)無(wú)毒。

程序 A（乙醇脂質(zhì)溶液：低聚物水溶液）

  1. 將陽(yáng)離子脂質(zhì)溶解在乙醇中。

    1. 如果脂質(zhì)樣品儲(chǔ)存在氯仿中，請(qǐng)使用干燥氮?dú)饣驓鍤庹舭l(fā)氯仿，并將脂質(zhì)殘留物置于真空系統(tǒng)上 1 小時(shí)以除去殘留的氯仿。

    2. 將乙醇添加到干燥的脂質(zhì)殘留物中，并使用適度的熱量（40-50°C）和超聲處理（如果需要）全部溶解。

    3. 調(diào)節(jié)濃度，使添加到低聚物水溶液中的乙醇脂質(zhì)溶液的體積為水溶液體積的10%。

  2. 將低聚物溶解在適當(dāng)體積的水性緩沖液中。

  3. 將乙醇脂質(zhì)溶液以脂質(zhì)：低聚物的重量比 10:1 添加到低聚物水溶液中。

    1. 通過(guò)渦旋或超聲處理全部混合脂質(zhì)：低聚物懸浮液。

    2. 將懸浮液孵育 5-10 分鐘，以形成脂質(zhì)：低聚物復(fù)合物。

    3. 如果不需要?dú)埩粢掖?，則將懸浮液加熱至 40-50°C，并向懸浮液中鼓入氮?dú)?，直至除去乙醇?/span>

程序 B（乙醇脂質(zhì)溶液：乙醇低聚物溶液）

  1. 將陽(yáng)離子脂質(zhì)溶解在乙醇中。

    1. 如果脂質(zhì)樣品儲(chǔ)存在氯仿中，請(qǐng)使用干燥氮?dú)饣驓鍤庹舭l(fā)氯仿，并將脂質(zhì)殘留物置于真空系統(tǒng)上 1 小時(shí)以除去殘留的氯仿。

    2. 將乙醇添加到干燥的脂質(zhì)殘留物中，并使用適度的熱量（40-50°C）和超聲處理（如果需要）全部溶解。

  2. 將低聚物溶解在合適體積的乙醇中。

  3. 將乙醇溶液按脂質(zhì)：低聚物 10:1 的重量比混合。

    1. 通過(guò)渦旋或超聲處理全部混合脂質(zhì)：低聚物懸浮液。

    2. 將懸浮液孵育 5-10 分鐘，以形成脂質(zhì)：低聚物復(fù)合物。

    3. 使用干燥氮?dú)狻鍤?、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器等蒸發(fā)乙醇，并在真空系統(tǒng)上干燥脂質(zhì)殘留物1小時(shí)以除去殘余乙醇。

  4. 將脂質(zhì)：低聚物復(fù)合物重懸于水性緩沖液中并超聲處理以分散。





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