creative-enzymes 熒光酶的測(cè)定

時(shí)間：2024/2/29閱讀：553

Creative Enzymes提供高質(zhì)量的生物分析服務(wù)和合同研究，專門從事酶活性分析，滿足制藥、生物技術(shù)和診斷行業(yè)客戶的需求。多年來，Creative Enzymes一直是熒光酶檢測(cè)領(lǐng)域經(jīng)驗(yàn)豐富的公司。我們的測(cè)量能力廣泛，涵蓋各種酶，包括氧化還原酶、轉(zhuǎn)移酶、水解酶、裂解酶、異構(gòu)酶和連接酶。在解決具體問題、優(yōu)化操作以及酶活性測(cè)量方法開發(fā)的過程中，我們始終與客戶密切合作。

熒光是一種發(fā)射現(xiàn)象，其中吸收輻射的波長(zhǎng)始終低于發(fā)射（熒光）波長(zhǎng)（能量較高）。熒光酶測(cè)定利用產(chǎn)物底物熒光光譜的差異來測(cè)量酶反應(yīng)（圖 1）。吸收光后，基態(tài) (S ₀ ) 的熒光團(tuán)被激發(fā)到更高能量的單線態(tài)水平。_{在皮秒時(shí)間尺度內(nèi)發(fā)生的快速熱化使受激分子處于第一激發(fā)態(tài) (S 1} )的很低振動(dòng)能級(jí)。在系統(tǒng)發(fā)射光子后衰減回到基態(tài)之前，這種激發(fā)單線態(tài)可以保持很短的時(shí)間（納秒量級(jí)）。由于這種激發(fā)到基態(tài)躍遷的能量通常比激發(fā)過程的能量低，因此發(fā)射的波長(zhǎng)通常比激發(fā)的波長(zhǎng)更長(zhǎng)。這種波長(zhǎng)差異稱為斯托克斯位移。實(shí)際上，所有熒光數(shù)據(jù)都可以通過五個(gè)參數(shù)之一來描述：激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、量子產(chǎn)率、熒光壽命以及發(fā)射的各向異性或偏振。

Perrin-Jablonski 圖。 S0 是基態(tài)，而 S1 和 S2 是電子激發(fā)態(tài)。 圖 1： Perrin-Jablonski 圖。S ₀是基態(tài)，而S ₁和S ₂是電子激發(fā)態(tài)。
參考文獻(xiàn)： Eccleston JF，Hutchinson JP，Jameson D M。藥物化學(xué)進(jìn)展，2005，43：19-48。

熒光測(cè)定廣泛用于確定酶反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)機(jī)制，也用于配置高通量篩選的動(dòng)力學(xué)測(cè)定。要使用基于熒光的測(cè)定進(jìn)行測(cè)量，反應(yīng)需要從非熒光底物形成熒光產(chǎn)物，反之亦然。第一種情況的一個(gè)例子是在水解酶測(cè)定中使用非熒光試鹵靈丁酯作為底物，其中酯鍵的酶裂解產(chǎn)生高熒光試鹵靈。后者的一個(gè)例子是涉及將 NAD(P)H 氧化為非熒光 NAD(P) ⁺的任何酶反應(yīng)。熒光共振能量轉(zhuǎn)移 (FRET) 也可用于酶測(cè)定，其中酶促反應(yīng)改變底物中兩個(gè)熒光團(tuán)的距離或方向，從而改變觀察到的供體或受體的熒光強(qiáng)度。

熒光酶測(cè)定通常比分光光度測(cè)定靈敏得多，但可能會(huì)受到雜質(zhì)造成的干擾以及許多熒光化合物在光照下的不穩(wěn)定性。在當(dāng)前階段，對(duì)通?？蓮娜祟惢颊攉@得的組織、細(xì)胞或液體的小樣本進(jìn)行診斷酶評(píng)估的數(shù)量不斷增加，這些測(cè)定的高靈敏度特別有價(jià)值。熒光測(cè)定還特別適合反應(yīng)混合物的小型化。通過這種方式，可以進(jìn)一步大幅提高靈敏度，從而減少對(duì)酶和熒光底物樣品的需求。隨著非常昂貴或稀缺的熒光底物的出現(xiàn)，后者的保護(hù)變得重要。

憑借最新的知識(shí)和先進(jìn)的儀器，Creative Enzymes有信心為客戶提供可靠的熒光酶檢測(cè)，提供所有類型酶活性水平的量化。通過不斷追求好的服務(wù)，Creative Enzymes贏得了數(shù)以萬(wàn)計(jì)客戶的信任?？傮w而言，Creative Enzymes致力于實(shí)現(xiàn)最高的客戶滿意度，并不斷改進(jìn)服務(wù)和質(zhì)量管理。

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