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更新時(shí)間：2025-02-11 19:05:54瀏覽次數(shù)：20次

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產(chǎn)品名稱(chēng)：EAC-E2G8小鼠腹水瘤細(xì)胞、EAC-E2G8小鼠腹水瘤細(xì)胞、EAC-E2G8小鼠腹水瘤細(xì)胞、EAC-E2G8小鼠腹水瘤細(xì)胞；

常溫細(xì)胞收貨當(dāng)天處理方式

1.收到常溫細(xì)胞后，及時(shí)拍照記錄有無(wú)漏液/瓶身破損現(xiàn)象。

2.鏡下觀察有無(wú)微生物污染現(xiàn)象，拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細(xì)胞狀態(tài)和有無(wú)染菌現(xiàn)象，方便后續(xù)售后處理。

3.用 75%酒精擦拭瓶身，置于培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng) 2~4h 后進(jìn)行傳代操作。

4.觀察細(xì)胞密度若超過(guò) 80%則可正常傳代處理(有的原代細(xì)胞不可傳代，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況決定)，傳代推薦比例 1：2 到 1：3（按實(shí)際收貨細(xì)胞密度決定，若不確定可聯(lián)系技術(shù)支持）；若細(xì)胞密度不到 80%則可取出部分培養(yǎng)基留 6ml 左右原瓶培養(yǎng) 基繼續(xù)培養(yǎng)，注意擰松瓶蓋或更換透氣瓶蓋；懸浮細(xì)胞注意離心所有培養(yǎng)基以收集細(xì)胞。

5.由于氣溫，運(yùn)輸?shù)扔绊懺斐少N壁細(xì)胞漂浮的，請(qǐng)將細(xì)胞離心收集后在離心管中消化后進(jìn)行傳代（參考附件），或及時(shí)聯(lián)系技術(shù)支持進(jìn)行指導(dǎo)傳代。

6.若觀察到異?；蛘邔?duì)細(xì)胞有疑問(wèn)，請(qǐng)及時(shí)跟代理商或者我們聯(lián)系；對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)操作及培養(yǎng)注意事項(xiàng)有疑問(wèn)的，可跟我們的技術(shù)支持交流。

附:收到貼壁細(xì)胞漂浮處理方法（部分細(xì)胞由于貼壁松散，會(huì)出現(xiàn)運(yùn)輸后漂浮，冬天氣溫低時(shí)也會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞收縮漂浮，屬于不可避免因素，正確處理后都可以正常生長(zhǎng)）

1、將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無(wú)菌離心管，離心收集細(xì)胞（1200rpm 3min）去除舊培養(yǎng)基；

2、用 PBS 重懸細(xì)胞，將所有細(xì)胞收集到一個(gè)離心管中，再次離心（1200rpm 3min）去除 PBS；

3、加入 1ml 左右 0.25%重懸細(xì)胞，混勻即可，不能吹打太多次，放入培養(yǎng)箱消化細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞特性決定消化時(shí)間（TM3、TM4、293 系列約 1~2 分鐘）；

4、消化好后，用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞團(tuán)分散，迅速加入 3-5ml 含血清的培養(yǎng)基混勻以終止消化，離心（1200rpm 3min）去除；

5、加入 5ml 左右的細(xì)胞相應(yīng)的培養(yǎng)基混勻，按比例接入無(wú)菌培養(yǎng)瓶/皿中；

6、顯微鏡下觀察看細(xì)胞是否成均勻分散的單顆細(xì)胞，若有 3-5 個(gè)成團(tuán)的小細(xì)胞團(tuán)可不用重新消化，使之貼壁后待細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定后再消散細(xì)胞。

Isolation and culture of peripheral T cells

Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from old cancer patients (more than 60 years old) and young donors (25–30 years old) at Beijing Cancer Hospital (Beijing, China) were obtained by Ficoll-Paque (GE Healthcare, UK) gradient centrifugation, and then peripheral T cells (PTCs) were isolated using a Dynabeads⑥ UntouchedTM Human T Cells Kit (Thermo Fisher Scienti?c, USA) for the following experiments. After ?nishing the test of viability, PBMCs were cultured in T-cell culture medium, which consisted of X-VIVO 15 serum-free medium (Lonza, USA) appended with GlutaMAX (Thermo Fisher, USA), IL2 (50 U mL- 1; Peprotech, USA), IL-7 (10 ng mL- 1; Peprotech, USA), IL-15 (10 ng mL- 1, Peprotech, USA), OKT3 antibody (50 ng mL- 1; ACRO, USA)