XL1-Blue大腸桿菌克隆感受態(tài)細胞產(chǎn)品信息：組成 BC104-01 BC104-02XL1-BlueCompetentcells 10×100µl 20×100µlpUC19（0.1ng/µl） 5µl 5µl儲存條件：-70 ℃保存

XL1-Blue 大腸桿菌克隆感受態(tài)細胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC104-01 BC104-02
XL1-Blue Competent cells 10×100µl 20×100µl
pUC19（0.1ng/µl） 5µl 5µl
儲存條件：-70 ℃保存，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品介紹：
本公司生產(chǎn)的 XL1-Blue 感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌 XL1-Blue 菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，
可用于 DNA 的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達 10 7 cfu/µg，-70℃保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生
改變。每支感受態(tài)可以酌情分裝使用，降低了實驗的成本。質(zhì)量穩(wěn)定，使用方便，質(zhì)優(yōu)價廉。
基因型：recA1endA1gyrA96thi-1hsdR17supE44relA1lac[F’proABlacI qZΔM15:Tn10(tet r)]
產(chǎn)品特點：適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴增。能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。適合非甲基化DNA的轉(zhuǎn)化。
抗生素耐藥性：細胞具有四環(huán)素抗性。
操作步驟（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準進行）：
提示
?
感受態(tài)細胞應(yīng)保存在-70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免降低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。
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進行轉(zhuǎn)化操作時，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進行。
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為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到。
1. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨毎麘乙悍盅b到無菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。
（一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為 50-100μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。應(yīng)注意所用 DNA 體積
不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。）以下實驗以 100μl 感受態(tài)細胞為例。
2. 向感受態(tài)細胞懸液中加入目的 DNA，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置 30 分鐘。
3. 將離心管置于 42℃水浴中放置 60 秒鐘，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細胞冷卻 2 分鐘，該過程不要
搖動離心管。（此步驟也可將離心管置于室溫進行，時間不需十分準確，夏季或室溫較高時，可放置
5-8 分鐘左右；如果室溫較低，可延長時間至 8-15 分鐘左右。條件允許建議使用 42℃熱激方法。）
4. 向每個離心管中加入 500μl 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于 37℃ 150rpm，搖床
振蕩培養(yǎng) 60 分鐘，目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達，使菌體復(fù)蘇。
5. 無菌條件下，取適量菌液加到含相應(yīng)抗生素的 LB 固體培養(yǎng)基平板上，用無菌的細菌涂布器或玻璃珠將
細胞均勻涂開。等平板中的液體吸收后，倒置平板，37℃培養(yǎng) 12-16 小時。（涂布用量可根據(jù)具
體實驗來調(diào)整。轉(zhuǎn)化質(zhì)粒在 10ng 左右，90mm 平皿涂布 100µl，55mm 平皿涂布 50µl；連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)
化菌液建議離心后倒掉大部分上清，余 200µl，取 100µl 用于涂布。）
6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，視平板上菌落生長情況決定去留。
相關(guān)試劑及培養(yǎng)基的制備方法：
1. LB 液體培養(yǎng)基：稱取 10g Tryptone，5g Yeast Extract 和 10g NaCl 置于 1L 燒杯中。加入約 800ml 的
去離子水，溶解后用 2mol/L 的 NaOH 溶液調(diào)節(jié) pH 值至 7.0。加去離子水定容至 1L。分裝
后，121℃高壓滅菌 20 分鐘。
2. SOB 和 SOC 培養(yǎng)基：稱取 20g Tryptone，5g Yeast Extract，0.5g NaCl 置于 1L 燒杯中加入約 800ml 的
去離子水，溶解后再補加 10ml 250mM KCl 溶液，滴加 5M NaOH（約 0.2ml）調(diào) pH 至 7.0。加
入去離子水將培養(yǎng)基定容至 1L。121℃滅菌 20 分鐘。使用時加入 5ml 滅菌的 2M MgCl2溶液（此種
培養(yǎng)基稱為 SOB）。再補加經(jīng) 0.22μm 過濾除菌的 1M 葡萄糖溶液 2ml（此種培養(yǎng)基為 SOC）。
3. 轉(zhuǎn)化復(fù)蘇細菌用的液體 LB 培養(yǎng)基或 SOC 培養(yǎng)基：可以一次高壓 50ml 液體培養(yǎng)基，無菌狀態(tài)按 1ml
每管分裝于高壓滅菌的 1.5ml 離心管中，裝于自封袋中，凍存于-20℃中，每次用一支?？梢詷O大地避
免培養(yǎng)基污染和減少勞動量。
4. LB 固體選擇培養(yǎng)基：100ml LB 液體培養(yǎng)基中加入 1.5g 瓊脂粉，搖勻后，121℃高壓滅菌 20 分鐘。
冷卻至 50℃左右時加入相應(yīng)濃度的抗生素（如 AMP 濃度通常為 100μg/ml），混勻后倒在細菌用的無菌
培養(yǎng)皿中，等瓊脂凝固后即可使用。
5. IPTG：稱量 1.9g IPTG（MW=238.31）充分溶解于 40ml 滅菌水，濃度為 200mmol/L。用無菌
0.22μm過濾膜過濾除菌。小份分裝后，-20℃保存。
6. X-gal：用 DMF（二甲基甲酰胺）配制成 20mg/ml，小份分裝（1ml/份）后，-20℃避光保存。


南京萬木春生物科技有限公司（Najing Wanmuchun Biotechnology Co., Ltd)面向國內(nèi)外市場專業(yè)研發(fā)、生產(chǎn)和銷售細胞、 外泌體、ELISA 試劑盒、 抗體、重組蛋白及相關(guān)試劑。產(chǎn)品在免疫學(xué)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、代謝、 神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域內(nèi)都有科學(xué)文獻發(fā)表，被國內(nèi)外多所大學(xué)、研究機構(gòu)和藥學(xué)平臺使用并發(fā)表文獻多達1000多次。我公司憑借優(yōu)異的產(chǎn)品和完善的服務(wù) 體系現(xiàn)已受到廣大國內(nèi)外用戶的青睞和認可。
品牌優(yōu)勢
1、產(chǎn)品優(yōu)勢：產(chǎn)品具有高特異性、回收率高、線性好、變異系數(shù)低、穩(wěn)定性好；
2、質(zhì)量保證：產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，每批次產(chǎn)品必須通過 QA、QC 檢測才可出庫；
3、實力強大： 標(biāo)準實驗室、研發(fā)中心，動物房 ；
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6、研發(fā)、生產(chǎn)科研產(chǎn)品：ELISA 試劑盒：人、大小鼠、牛、兔、山羊、倉鼠、豬、馬、雞、犬、豚鼠、猴、綿羊等多種屬1000多種指標(biāo)；
抗體：兔多抗、鼠單抗種類豐富，一抗 1 萬余種，二抗 100 多種；
重組蛋白：多項發(fā)明，原核表達系統(tǒng)穩(wěn)定表達蛋白 1000 余種。


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