CLARITY相關(guān)試劑

CLARITY相關(guān)試劑

“CLARITY"作為新型的組織透明化技術(shù)，由斯坦福大學(xué)的Dr. Karl Deisseroth等發(fā)表于2013年3月的Nature雜志。由于CLARITY可用于熒光蛋白和抗體的免疫染色，有望用作分析大腦神經(jīng)回路的有效工具。

此外，“PACT（被動CLARITY技術(shù)，passive clarity technique）"在2014年發(fā)表，通過去除雙丙烯酰胺和增加表面活性劑的濃度，無需電泳即可實(shí)現(xiàn)被動性的組織透明化。

FUJIFILM Wako可提供文獻(xiàn)中實(shí)驗(yàn)方案中透明化步驟使用的試劑，如VA-044等試劑。

參考文獻(xiàn)

1） Chung,K et al. : Nature., 497, 332(2013).

2） Yang, B. et al., : Cell, 158(4), 945(2014).

◆CLARITY實(shí)驗(yàn)方案示例

 ● 水凝膠單體溶液組成（Hydrogel Monomer Solution）

?VA-044??????????? 1 g

?40% 丙烯酰胺 ?????40 mL

?2% 雙丙烯酰胺????10 mL

?10 × PBS ??????????40 mL

?16% 多聚甲醛?? 100 mL

?皂苷???????????200 mg

?水??????????????210 mL

● 電泳buffer組成

?硼酸???123.66 g

?SDS????400 g

?NaOH ???調(diào)至pH 8.5

?水?????最多可加入10 L

● 脂質(zhì)除去用電泳槽

?Electrophoresis Chamber For Lipid Extraction（NIHON EIDO）

● 循環(huán)泵

?GPU-1、GPU-2（Azscience）

◆PACT 實(shí)驗(yàn)方案示例

● A4P0組成

· VA-044???????????0.25%

· 丙烯酰胺 ?????4%

· 含有上述成分的PBS溶液

● RIMS組成（RI 1.46）

· tween 20???0.1%

· die氮化鈉????0.01%

· 含有上述成分的0.02 M PBS???30 mL

· dian海醇???40 g

· NaOH ???調(diào)整至pH7.5

◆應(yīng)用數(shù)據(jù)

經(jīng)CLARITY處理的小鼠大腦

經(jīng)CLARITY處理的小鼠大腦成像

圖2.  經(jīng)CLARITY處理的Thy1-YFP（H Line）小鼠大腦的熒光觀察

（A）從大腦皮層到海馬體的３D觀察圖像；（B）大腦皮層Ⅴ層錐體細(xì)胞的樹突圖像

拍攝條件：雙光子；使用設(shè)備：Olympus FV1000正置顯微鏡，25倍浸沒物鏡

CLARITY處理+使用抗體的小鼠大腦成像

圖3. 經(jīng)CLARITY處理后，使用Iba1抗體染色的Thy1-YFP（Ｈ線）小鼠大腦的熒光觀察

（A）在大腦皮層的小膠質(zhì)細(xì)胞３D觀察圖像；（B）從表層觀察皮質(zhì)層Ⅰ的圖像

拍攝條件：單光子；使用設(shè)備：Olympus FV1000正置顯微鏡，25倍浸沒物鏡

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