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液相色譜法檢測(cè)大霉素普魯卡因維B12顆粒中維生素B12的含量
慶大霉素普魯卡因維B12顆粒為復(fù)方制劑，其組分為每袋含硫酸慶大霉素20mg；鹽酸普魯卡因0.1g；維生素B12（Vitamin B12，V B12）0.02mg。所用輔料包括甘露醇、阿司帕坦、食用蘋果香精、羧甲基纖維素鈉和檸檬黃。其中V B12的含量極低，難于準(zhǔn)確定量。目前，國(guó)內(nèi)尚無檢測(cè)慶大霉素普魯卡因維生素B12顆粒中微量V B12的含量測(cè)定方法，國(guó)外藥典也未見收藏。國(guó)內(nèi)用于檢測(cè)V B12的方法多采用微生物法；不少文獻(xiàn)報(bào)道使用HPLC法測(cè)定微量的V B12，多由于靈敏度不夠等原因，無法準(zhǔn)確檢測(cè)藥品中的微量V B12；此外，近些年國(guó)內(nèi)外已有文獻(xiàn)報(bào)道使用電化學(xué)方法測(cè)定B12的含量，但方法復(fù)雜，繁瑣。
快速分離液相色譜（Ｒapidresolutionliquidchro-matography，ＲＲLC）是近年來迅速發(fā)展的液相色譜新技術(shù)，其原理是通過增加液相系統(tǒng)耐高壓性能，降低色譜柱固定相粒徑、色譜柱內(nèi)徑及長(zhǎng)度，從而提高色譜柱柱效，實(shí)現(xiàn)縮短分析時(shí)間，提高分離度和靈敏度的目的。
可采用ＲＲLC法測(cè)定慶大霉素普魯卡因維生素B12顆粒中微量V B12的含量，方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，靈敏度高。
所需儀器：快速分離液相色譜儀（配G1312B二元泵，檢測(cè)器，柱溫箱，脫氣機(jī)，500μL擴(kuò)展進(jìn)樣環(huán)及色譜工作站）。
色譜條件：（3.0mm×150mm，1.8μm）；流動(dòng)相：0.005mol/L磷酸二氫鉀溶液（每1000mL加磷酸0.5mL）－甲醇（75∶25），流速：0.5mL/min。檢測(cè)波長(zhǎng)：361nm，柱溫：40℃，進(jìn)樣量：200μL。