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液相色譜法檢測(cè)人血漿甲氨蝶呤的濃度HPLC
甲氨蝶呤（methotrexate，MTX）是二氫葉酸還原酶抑制劑，是通過抑制細(xì)胞內(nèi)二氫葉酸酶達(dá)到殺滅腫瘤細(xì)胞的作用。目前臨床采用大劑量甲氨蝶呤配合亞葉酸鈣解救（HD-MTX+CF）治療急性淋巴細(xì)胞白血?。?/span>ALL）。有研究表明，ALL患者MTX血藥濃度與不良反應(yīng)和療效之間存在密切關(guān)系且個(gè)體差異大。
為了安全有效地實(shí)施HD-MTX給藥，監(jiān)測(cè)MTX用藥后的血藥濃度尤為必要，以確保臨床用藥安全有效。目前測(cè)定MTX血藥濃度的方法有熒光偏振免疫分析法、液相色譜法（HPLC）、LC-MS法等。熒光偏振免疫分析法成本昂貴，且專一性差，難以推廣，而且由于代謝產(chǎn)物的存在抗體可能交叉反應(yīng)使測(cè)定結(jié)果偏高。國(guó)外采用LC-MS法測(cè)定MTX血藥濃度雖專一性較強(qiáng)且靈敏度高，但此方法費(fèi)用高，操作復(fù)雜。而HPLC具有專屬性高、靈敏、準(zhǔn)確、適用性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，更適合廣泛應(yīng)用。
檢測(cè)儀器：液相色譜儀（色譜工作站，SPDiOA—VP紫外檢測(cè)器）；旋渦混合器；臺(tái)式離心機(jī)。
色譜條件：色譜柱柱溫為35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為303nm：流動(dòng)相為乙腈-0．16mol/L乙酸鈉水溶液（12∶88）；流速1ml/min。
測(cè)定方法
對(duì)照品溶液制備：精密稱取MTX對(duì)照品1．5mg置50ml容量瓶中加甲醇溶解并定容至刻度，得30．0μg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)存液，置于4℃冰箱保存。使用時(shí)精密吸取適量對(duì)照品儲(chǔ)存液加人血漿稀釋至所需濃度。
血漿樣品預(yù)處理：取樣品血漿200μl，置于1．5mlEP塑料管中，加入50μl6％高氯酸液，沉淀血漿中的蛋白質(zhì)，旋渦振搖2min，于4000r/min離心5min。
取20μl上清液進(jìn)樣，記錄色譜圖。