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檢測(cè)原理:試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被類總黃酮(flavone)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的類總黃酮(flavone)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法:植物總黃酮(flavone)ELISA檢測(cè)試劑盒
1. 樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因?yàn)榀B氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
2. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行。
3. 植物萃取液或其它相關(guān)樣本:請(qǐng)1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè)。
4. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
洗板方法:手工洗板方法:甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。
植物總黃酮(flavone)ELISA檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng):
1) 充分混勻?qū)ΡWC反應(yīng)結(jié)果很重要,在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96板孔,以保證混勻。
2) TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑或金屬,否則容易失效。
3) 加樣時(shí)請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭,一方面避免交叉污染,另一方面也避免吸取體積的誤差。加樣過程中必須避免氣泡的產(chǎn)生。
4) 檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔,以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
5) 洗滌過程非常重要,洗滌不充分會(huì)下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
上海軒澤康生物ELISA檢測(cè)試劑盒優(yōu)勢(shì):
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