ABPP如何繪制蛋白酶活性圖譜？探索靶點 返回列表頁

ABPP如何繪制蛋白酶活性圖譜？探索靶點新維度檢測技術服務詳情介紹

蛋白酶是一類至關重要的酶類分子，廣泛參與細胞凋亡、炎癥反應、腫瘤轉移等生物過程。然而，與蛋白表達分析不同，蛋白酶的活性狀態(tài)，而非其總表達水平，才真正決定其生物學功能。因此，繪制一張蛋白酶活性圖譜，成為深入解析其生理病理作用機制的關鍵步驟。

近年來，活性位點探針dànbáizhì譜技術（Activity-Based Protein Profiling, ABPP）憑借其對酶類活性狀態(tài)的高選擇性標記能力，成為構建蛋白酶活性圖譜的核心方法。本文將系統(tǒng)拆解ABPP繪制蛋白酶活性圖譜的全流程，帶您深入了解其技術機制、實驗策略與實際應用價值。

一、什么是ABPP？——蛋白酶活性的“功能指紋技術"

ABPP（Activity-Based Protein Profiling）是一種通過小分子探針共價標記活性酶類蛋白，并結合質譜（MS）分析進行高通量鑒定和定量的功能組學技術。與dànbáizhì組不同，ABPP聚焦“功能狀態(tài)"，尤其適合動態(tài)活性調控的酶類蛋白（如sīānsuān蛋白酶、半guāngānsuān蛋白酶、金屬蛋白酶等）。

基本原理包括三要素：

1、特異性探針識別并共價結合活性酶；

2、標簽或連接基團實現富集與檢測；

3、高分辨質譜進行鑒定與活性定量。

這一策略使得研究人員能夠構建出在特定條件下真正活躍的蛋白酶圖譜，極大提升了靶點研究的功能關聯(lián)性。

二、ABPP繪制蛋白酶活性圖譜的核心流程

繪制一張高質量的蛋白酶活性圖譜，涉及從探針篩選到質譜定量的多個關鍵技術節(jié)點：

1、設計與選擇合適的活性探針（ABP）

ABP通常由三部分組成：

探針的設計需高度針對目標酶家族。

2、在生物樣本中進行探針標記

探針可以作用于多種生物樣本類型，包括：

（1）細胞裂解液：適合高通量篩選；

（2）活細胞：反映原位活性；

（3）組織樣本/切片：適用于疾病組織對比分析。

標記條件（濃度、溫度、時間）需優(yōu)化以確保特異性結合并zuì小化非特異性吸附。

3、富集與蛋白酶消化

根據報告基團性質，采用不同富集策略：

（1）shēngwùsù標記→鏈霉親和磁珠富集；

（2）點擊化學位點→點擊反應連接熒光或富集標簽；

（3）熒光探針→可結合流式或膠內成像。

隨后進行yídànbáiméi等消化步驟，獲得可上機的多肽混合物。

4、LC-MS/MS高分辨質譜分析

通過LC-MS/MS分析已標記并消化的樣本，通常結合以下策略提高深度與精度：

（1）Label-Free或TMT/iTRAQ等定量策略；

（2）利用FAIMS、DIA等技術增強通量；

結合數據庫搜索和活性位點注釋工具進行活性蛋白酶的jīngquè識別。

5、數據分析與活性譜圖構建

zuì終可獲得目標樣本中處于活性狀態(tài)的蛋白酶清單，并繪制其在不同處理條件下的活性變化熱圖、富集通路與調控網絡。

三、ABPP繪制蛋白酶活性圖譜的優(yōu)勢解析

ABPP能夠解決傳統(tǒng)蛋白組學無法覆蓋的盲區(qū)，具體優(yōu)勢包括：

特別適用于如下研究場景：

1、藥物作用機制解析（如靶點驗證、脫靶效應）；

2、腫瘤與神經退行性疾病中蛋白酶功能篩查；

3、疾病標志物開發(fā)與差異分析。

百泰派克生物科技：一站式ABPP蛋白酶活性圖譜解決方案

百泰派克生物科技提供從探針篩選到圖譜繪制的一站式ABPP解決方案：

? 支持多種酶類活性探針篩選與定制；

? 具備高通量富集與質譜檢測平臺（Orbitrap Exploris 480）；

? 提供zhuānyè的活性數據分析、通路注釋與靶點預測服務；

? 可結合TMT定量、組織成像等技術提升研究深度。

我們致力于將復雜的功能組學流程轉化為可交付、可發(fā)表、可轉化的高質量科研數據，賦能基礎研究與藥物開發(fā)。

蛋白酶活性圖譜不僅是一張數據圖，更是一張揭示疾病機制與藥物靶點的“功能地圖"。通過ABPP，科研人員得以在分子層面jīngzhǔn描繪蛋白酶的動態(tài)活性分布，為靶向治療、藥物篩選和生物標志物開發(fā)提供堅實的技術支撐。若您希望通過ABPP繪制蛋白酶活性圖譜，深入挖掘潛在靶點或機制通路，歡迎聯(lián)系百泰派克生物科技獲取定制化技術支持。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上*的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統(tǒng)進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優(yōu)勢：

1.技術*，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質生物藥物分析服務，幫助生物醫(yī)藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優(yōu)質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質的生物質譜分析服務!

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