淀粉含量檢測(cè)試劑盒

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃保存； 試劑二：液體 20mL×1 瓶，4℃保存； 試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×10mg支，4℃保存；臨用前加入 1mL 蒸餾水溶解，制備 10mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說(shuō)明：

淀粉是植物中糖的主要儲(chǔ)存形式，其含量測(cè)定對(duì)于評(píng)價(jià)食品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和調(diào)查植物體內(nèi)糖代謝都有重要意義。

利用 80％乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開，進(jìn)一步采用酸水解法分解淀粉為葡萄糖，采用蒽酮比色法測(cè)定葡萄糖含量，即可計(jì)算淀粉含量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽、冰、濃硫酸（不允許快遞）、蒸餾水。

操作步驟：

一、淀粉提取：

1、稱取約 0.1g 樣品于研缽中研碎，加入 1mL 試劑一，充分勻漿后轉(zhuǎn)移到 EP 管中，80℃水浴提取

30min，3000g，常溫離心 5min，棄上清，留沉淀。

2、沉淀中加入 0.5mL 雙蒸水，放入沸水浴中糊化 15min（蓋緊，以防止水分散失）。

3、冷卻后，加入 0.35mL 試劑二，常溫提取 15min，振蕩 3-5 次。

4、加入 0.85mL 雙蒸水，混勻，3000g，常溫離心 10min，取上清液。

5、取上清液 100μL 加入 700μL 蒸餾水后即進(jìn)行了八倍稀釋測(cè)定。注：若稀釋八倍后樣品吸光度大于 1.5 或小于 0.1，建議將樣品再進(jìn)行適當(dāng)稀釋或濃縮后測(cè)量。

標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)備：

將 10mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行二倍稀釋得到 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.00156mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

二、測(cè)定操作表：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 620nm，蒸餾水調(diào)零。

2、調(diào)節(jié)水浴鍋至 95℃。

3、工作液的配制：臨用前在試劑三中加入 13.5mL 蒸餾水后，緩慢加入 76.5mL 濃硫酸，不斷攪拌， 充分溶解，待用。

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4、標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定：取 0.2mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液（蒸餾水做空白）和 1mL 工作液至 EP 管中，95℃水浴 10 min

（蓋緊，防止水分散失），自然冷卻至室溫，在 620 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值 A 標(biāo)準(zhǔn)及 A 空白。計(jì)算ΔA=A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白。

5、樣本測(cè)定：取0.2mL樣本和1mL工作液至EP管中，95℃水浴10 min（蓋緊，防止水分散失），自然冷卻至室溫，在620 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值A測(cè)定。ΔA′=A測(cè)定- A空白。

三、淀粉含量計(jì)算：

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：

以 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.00156mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液為橫坐標(biāo)，ΔA 為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程 y=kx+b，將ΔA′代入方程得到 x（mg/mL）； 2、淀粉含量計(jì)算：

（1）、按照蛋白濃度計(jì)算

淀粉含量(mg/mg prot)=x×稀釋倍數(shù)×V 提取÷（Cpr×V 提取）=8x÷Cpr 2、按樣本鮮重計(jì)算

淀粉含量(mg/g 鮮重)=x×稀釋倍數(shù)×V 提取÷W=13.6x÷W

V 提取：提取后體積，1.7 mL；Cpr：樣本提取后蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；稀釋倍數(shù)：8。

注意事項(xiàng)：由于工作液具有強(qiáng)腐蝕性，請(qǐng)謹(jǐn)慎操作。

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注意事項(xiàng)

1、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套及口罩操作；

2、為保持本產(chǎn)品的優(yōu)良使用效果，請(qǐng)務(wù)必按照建議的儲(chǔ)存條件進(jìn)行保存；

3、本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用，不可用于臨床診斷或治療。

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