N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-D-glucosidase, NAG） 試劑盒

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

NAG 是溶酶體中的一種酸性水解酶，廣泛存在于各種組織、體液和細(xì)胞中，以前列腺和腎近曲小管細(xì)胞內(nèi)含量最高。NAG 活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。

測定原理： 

NAG 分解 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基苯酚，后者在 400nm 有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計(jì)算 NAG 活性。

自備用品：

酶標(biāo)儀/可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 2.5mL 蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。

試劑二：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。試劑三：液體 13mL×1 瓶，4℃保存。粗酶液提?。?/span>

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量

（10⁴ 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、 酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 400nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定（在 EP 管或 96 孔板中依次加入下列試劑）：

迅速混勻，放入 37℃保溫 30min

充分混勻， 400nm 處測定吸光值 A，計(jì)算 ΔA=A 測定-A 對照。每個(gè)測定管需設(shè)一個(gè)對照管。

NAG 活性計(jì)算：

a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為 y = 0.00585x +0.0083；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（nmol/mL），y 為吸光值。

2、血清（漿）NAG 活力的計(jì)算

單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位。

NAG 活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V 反總]÷V 樣÷T =39.89×(ΔA-0.0083)

3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中 NAG 活力的計(jì)算

（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位。

NAG 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V 反總]÷(V 樣×Cpr)÷T

=39.89×(ΔA-0.0083) ÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位。

NAG 活性(nmol/min/g 鮮重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=39.89×(ΔA-0.0083)÷W

（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位。

NAG 活性(nmol/min /10⁴cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T

=0.08×(ΔA-0.0083)

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.07mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.01mL；V 樣總： 加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g； 500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬；T：反應(yīng)時(shí)間，30min。

b. 用 96 孔板測定的計(jì)算公式如下

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為 y = 0.0039x +0.0083；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（nmol/mL），y 為吸

光值。

2、血清（漿）NAG 活力的計(jì)算

單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位。

NAG 活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V 反總]÷V 樣÷T =59.83×(ΔA-0.0083)

3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中 NAG 活力的計(jì)算

（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位。

NAG 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V 反總]÷(V 樣×Cpr)÷T

=59.83×(ΔA-0.0083) ÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位。

NAG 活性(nmol/min/g 鮮重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=59.83×(ΔA-0.0083)÷W

（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生 1nmol 對-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活性單位。

NAG 活性(nmol/min /10⁴cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T

=0.12×(ΔA-0.0083)

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.07mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.01mL；V 樣總： 加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g； 500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬；T：反應(yīng)時(shí)間，30min。

上海語純生物科技有限公司，是由具有*生命科學(xué)、生物技術(shù)背景人員共同創(chuàng)辦的技術(shù)企業(yè)。公司專注于原代細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑產(chǎn)品，為高校、食品、醫(yī)藥、生物研究等領(lǐng)域提供相關(guān)技術(shù)支持和服務(wù)。

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注意事項(xiàng)

1、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套及口罩操作；

2、為保持本產(chǎn)品的優(yōu)良使用效果，請務(wù)必按照建議的儲存條件進(jìn)行保存；

3、本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用，不可用于臨床診斷或治療。

N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-D-glucosidase, NAG） 試劑盒