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PAGE凝膠銀染試劑盒 凝膠染色

NobleRyder  G5098  PAGE凝膠銀染試劑盒,蛋白銀染試劑盒 蛋白快速銀染試劑盒,PAGE Gel Silver Staining Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：G5098

產(chǎn)品名稱：PAGE凝膠銀染試劑盒,蛋白銀染試劑盒 蛋白快速銀染試劑盒,PAGE Gel Silver Staining Kit

產(chǎn)品規(guī)格：1L

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

別名：蛋白銀染試劑盒 蛋白快速銀染試劑盒

英文名稱：PAGE Gel Silver Staining Kit

中文名稱：PAGE凝膠銀染試劑盒

規(guī)格：1L

儲(chǔ)存條件：RT，avoid light，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品介紹

 蛋白質(zhì)條帶的銀染是基于蛋白質(zhì)中各種基團(tuán)（如琉基、碳基等）與銀的結(jié)合，然后用還原劑如甲醛在堿性環(huán)境下使Ag+還原成銀顆粒，可把蛋白電泳帶染成黑褐色。它主要用于聚丙烯酰胺凝膠電泳染色。其靈敏度比考馬斯亮藍(lán)高，該產(chǎn)品整個(gè)過(guò)程操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，能檢測(cè)到10ng以下的蛋白條帶。

操作步驟（僅供參考）:

一、      染色液配制(無(wú)水乙醇自備)

需要配制的染色液體積根據(jù) PAGE 膠的大小而定，一般的 mini-PAGE 膠需要 20-30mL。配制用 的器皿清洗干凈后用去離子水涮洗，染色液須用去離子水配制，現(xiàn)用現(xiàn)配。如果配制的溶液體積不 是 100mL，可以按比例改變各成分用量。

1. 固定液：取 40mL 無(wú)水乙醇，10mL 染色液 A 加去離子水至 100mL，混勻；

2. 敏化液： 取 30mL 無(wú)水乙醇，10mL 染色液 C 加去離子水至 100mL，混勻；

3. 銀染液：稱取 0.12g 試劑 E，用 50mL 去離子水溶解，加入 10ul 染色液 B 混勻，加去離子水 至 100mL 現(xiàn)用現(xiàn)配。

4. 顯色液：10mL 顯色液 D 和 30μL 染色液 B 加入去離子水至 100mL，混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。

5. 終止液：取 5mL 染色液 A 加去離子水稀釋至 100mL，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二、染色：

1. PAGE 電泳結(jié)束后，將 PAGE 蛋白膠轉(zhuǎn)移至玻璃平皿或搪瓷盤中，用固定液固定 30min。

2. 將 PAGE 膠轉(zhuǎn)移至敏化液中，使染液沒過(guò) PAGE 膠，室溫作用 30min?？芍糜趽u床上緩慢搖晃

3. 棄去敏化液，用去離子水漂洗三次，每次 10min。

4. 將 PAGE 膠轉(zhuǎn)移至銀染液中，使染液沒過(guò) PAGE 膠，室溫?fù)u晃 40min。

5. 將 PAGE 膠轉(zhuǎn)移至顯色液中，使顯色液沒過(guò) PAGE 膠，室溫?fù)u晃，該顯色一般在 10min右。

6. 再選擇合適的時(shí)間進(jìn)行終止，棄去顯色液，加入終止液即可。最后可進(jìn)行信號(hào)收集保存。

注意事項(xiàng)：

1. 銀染主要出現(xiàn)在 PAGE 膠的表面，使用薄膠（0.5-0.75mm）可以提高靈敏度。

2. 對(duì)于考馬斯亮藍(lán)染色的 SDS-PAGE 膠，可用甲醇將膠漂洗后，繼續(xù)進(jìn)行銀染。考染過(guò)程中 的乙酸會(huì)干擾銀染，因此要確保將 PAGE 凝膠中殘留的乙酸che底洗凈。

3. 不同蛋白質(zhì)對(duì)銀染的反應(yīng)是不一樣的，尤其是堿性蛋白染色效果差。因此，不宜用銀染測(cè) 定不同蛋白的比例。

4. 染色過(guò)程中，緩慢的振蕩是必要的，一般選擇 40-60 rpm.

5. 凝膠表面的裂紋多是由于壓力、手印及表面干燥所致，所以全程中都應(yīng)帶手套操作。

6. PAGE 凝膠背景呈均一的黑色多是水中的雜質(zhì)引起的，所以溶液的配制應(yīng)使用電導(dǎo)率小于 1 μS 的去離子水。

7. 如果染色后有呈灰塵或煙霧狀灰色或棕色的沉淀出現(xiàn)在凝膠表面，可能是在幾步漂洗過(guò)程 中洗得不夠che底，或是染色過(guò)程時(shí)溫度太低。

8. 較深的銀染背景多是丙烯酰胺中的雜質(zhì)所致。

9. PAGE 膠中的甘油、尿素、gan氨酸、Triton X-100 和兩性電解質(zhì)這些物質(zhì)會(huì)干擾銀染。

10. 室溫操作時(shí)，溫度的波動(dòng)往往會(huì)干擾銀染的效果，恒溫水浴可以解決這個(gè)問(wèn)題。

11. 憑借戊二醛預(yù)處理可以使各種蛋白質(zhì)的染色提高 40 倍。

12. 染色使用的玻璃器皿必須非常干凈，用酸浸泡可以滿足要求。

13. 銀染應(yīng)盡快照相，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，蛋白條帶會(huì)變淺，而背景會(huì)加深。

14. 銀染容器zui理xiang的是玻璃平皿，其次是搪瓷盤和密胺塑料盤等。

15. 試劑如有沉淀析出，混勻溶解（可加熱）后室溫使用。

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