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諾博萊德 通用型植物總RNA提取試劑盒(含DNase I )

Universal Plant Total RNA Mini Kit通用型植物總 RNA 提取試劑盒（含 DNase I）

目錄號：91512

產(chǎn)品內容

自備試劑

無水乙醇

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）下，存放 12 個月，不影響使用效果。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

產(chǎn)品簡介

適用于提取絕大多數(shù)植物根、莖、葉、花的總RNA，配有DNase I，在RNA吸附膜上消化gDNA，得到的RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉錄組測序、RACE等。

本試劑盒是同類產(chǎn)品中適應性最guang泛，不但可以提取小麥、玉米、水稻、大豆、番茄、煙草、擬南芥等簡單植物，也可以提取茶樹葉片、棉花葉片、葡萄葉片、楊樹葉片、番薯葉片、花生葉片、香蕉葉片、荔枝葉片、白松葉片等多糖多酚含量一般的植物。

如果遇到果實、種子、中草藥，例如多糖多酚巨高的作物種子（小麥/玉米/大豆/水稻）、葡萄果實、藍莓果實、百合鱗莖、土豆塊莖，或者次級代謝產(chǎn)物巨豐富的葛根、虎杖、雪蓮等藥用植物，請選擇果實種子總RNA提取試劑盒(Cat#91512-50)。

產(chǎn)品特點

1. 無毒：免氯仿、免β-巰基乙醇！

2. 高質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高效：提取全過程僅需 30 min！

操作步驟

第一次使用前請先在漂洗液 RW 中加入指ding量無水乙醇，詳見瓶身的標簽。

提示：所有離心步驟必須在室溫（15~25℃）下進行。

1. 材料處理：

a．在液氮中研磨適量植物組織成細粉，取≤50mg 細粉加入 550 μl 裂解液 RLA，劇烈渦旋震蕩30sec，充分混勻。

冬天氣溫低， 37℃搖床放置 3 min，可增強裂解效果，提高產(chǎn)量

b．將裂解物 13,000 rpm 離心 5~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

注意：使用 1ml 裂解液 RLA 去裂解≤100 mg 樣品，RNA 產(chǎn)量會翻倍。

2. 小心吸取上清（約 480 μl，注意不要吸到沉淀）轉入一個新的離心管中，加入 0.5 倍體積（約 240 μl）的無水乙醇, 吹打混勻。

3. 將≤750μl 上清混合液加入 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 離心 2 min，倒棄濾液。此時，RNA 被吸附在膜上。重復此過程，直到溶液全部上柱。

4. 加入 350 μl 去蛋白液 RW1，室溫放置 1min，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

5. DNase I 工作液配制：取 45μl DNase Buffer 和 5μl DNase I 至新的RNase-Free 離心管中，輕輕吹打混勻。（處理多個樣品，按照比例放大）

6. 向 RNA 吸附膜中央加入 50μl 的 DNase I 工作液，室溫放置 15 min。

7. 加入 350μl 去蛋白液 RW1，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

8. 加入 500μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

9. 重復步驟 8 一次。

10. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上殘留的乙醇。

11. 取出 RNA 吸附柱，放入 RNase-free1.5 ml 離心管中，向 RNA 吸附膜的中央部位懸空滴加 30-50μl RNase-free H2O，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。

12. 提取的總 RNA，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，以免降解。

相關產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

附錄：

一、液氮研磨（自動研磨儀）—— 適用于各種樣本

a. 把研磨模塊也丟到液氮中預冷，直到?jīng)]有氣泡冒出視為預冷完畢。

b. 在2.0ml液氮研磨管中放入 3 mm 鋼珠 3 粒，放進≤50 mg 樣本，投入液氮中預冷。

c. 把預冷好的離心管插入研磨模塊中，放進研磨儀，設置 55 個頻率， 震蕩 30~60 sec。（以北京赫得京 N9548 為例）

d. 研磨完成后，馬上加 550 μl 裂解液 RLA，劇烈渦旋 30 sec，混勻。

e. 將裂解物 13,000 rpm 離心 5~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

二、免液氮直接研磨（自動研磨儀）—— 適用于新鮮樣本

a. 在 2.0 ml 液氮研磨管中加入 5 mm 鋼珠 1 粒，加 1 ml 裂解液 RLA，放進≤100 mg 樣本，設置 60 個頻率，震蕩 2 min。

b. 將裂解物 13,000 rpm 離心 5~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

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