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諾博萊德 植物microRNA快速提取試劑盒

FlashPure Plant miRNA Mini Kit植物 microRNA 快速提取試劑盒(免氯仿)

目錄號(hào)：91410

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無(wú)水乙醇

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

市場(chǎng)上常見(jiàn)的離心柱型的 RNA Kit/總 RNA Kit，不能有效吸附回收miRNA；Trizol 沉淀抽提法也不能有效沉淀回收全部 miRNA（生物通上有專題文章闡述）。

FlashPure Plant miRNA Mini Kit 是專用于提取各種植物組織的miRNA（包含 miRNA 的總 RNA），是通用型 microRNA 快速提取試劑盒（Cat#91015）的升級(jí)版，提取過(guò)程不再需要使用氯仿，并采用獨(dú)you的gDNA過(guò)濾器，高效濾除基因組，得到包含 miRNA 的總 RNA，可直接用于miRNA 和 mRNA 的 RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、芯片、測(cè)序等。

不但適用于普通植物，也適用于多糖多酚植物的根莖葉花，但是遇到糖酚含量巨豐富、次級(jí)代謝產(chǎn)物巨多的果實(shí)、種子、中草藥等樣本，應(yīng)選用果實(shí)種子 microRNA 提取試劑盒（Cat#91400），效果更佳。

注意事項(xiàng)

1. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)影響 RNA 的提取得率和質(zhì)量。

2. 樣品加入裂解液 MPA Plus 勻漿后，樣品可在–80℃保存一個(gè)月以上。

3. 取RNA樣本時(shí)，把新鮮組織樣本浸入 RNAsafe (RNA 樣品保存液，91115-

100)中，可在 37℃保存一天，在 25℃保存一周，在 4℃保存一個(gè)月，在-20℃或者–80℃長(zhǎng)期保存。

操作步驟（可得到包含 miRNA 的總 RNA）

提示：

① 第一次使用前, 先在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3 中加入

指ding量無(wú)水乙醇，詳見(jiàn)瓶上的標(biāo)簽。

② 對(duì)于 RNA 酶或者多酚特別豐富植物組織：操作前在裂解液 MPA Plus 中加入 β-巰基乙醇至終濃度 1%，例如 1 ml MPA Plus 中加入 10μl β-巰基乙醇，此裂解液最好現(xiàn)用現(xiàn)配，配好 MPA Plus 4℃可放置一個(gè)月。

③ 所有離心步驟均需要在室溫（15~37℃）下進(jìn)行，提取效果更佳！

1. 在液氮中研磨植物組織成細(xì)粉，取≤60 mg細(xì)粉加入600 μl 裂解液MPA Plus，立即劇烈渦旋震蕩 30 sec，充分混勻。

2. 將裂解物 13,000 rpm 離心 5 ~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

3. 小心吸取上清（一般 500 μl），轉(zhuǎn)入一個(gè) gDNA 過(guò)濾器中（過(guò)濾器放入收集管中），13,000 rpm 離心 1 min，保留濾液（RNA 在濾液中）。

4. 向?yàn)V液中加入 1.25 倍體積(一般 625μl )的無(wú)水乙醇，用移液器吹打混勻。

5. 每次轉(zhuǎn)移≤750 μl濾液混合物至RNA吸附柱中，13,000 rpm離心1min，此時(shí)，RNA 被吸附在膜上，棄濾液。重復(fù)此過(guò)程，直到溶液全部上柱。

6. 加入 700 μl Wash Solution 1（檢查是否已加入乙醇），室溫放置 1 min, 13,000 rpm 離心 30 sec，棄濾液。

7. 加入 500 μl Wash Solution 2/3（檢查是否已加入乙醇），13,000 rpm 離心 30 sec，棄濾液。

8. 重復(fù)步驟 7。

9. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上殘留的留乙醇。

10. 取出 RNA 吸附柱，放入一個(gè)新的 RNase-free 1.5 ml 離心管中，向 RNA吸附膜的中央懸空滴加 30-50 μl RNase-free H2O，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min，管底即包含 miRNA 的總 RNA。

11. 得到 RNA/miRNA，可直接用于下游實(shí)驗(yàn)，或于-70℃保存，以免降解。

相關(guān)產(chǎn)品：

71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加尾法）

71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR，加尾法）

71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25 + 71419-500）

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