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諾博萊德 果實(shí)/種子microRNA快速提取試劑盒

果實(shí)/種子 microRNA 快速提取試劑盒FlashPure Fruit/Seed miRNA Mini Kit

目錄號(hào)：91400

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙醇

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

市場(chǎng)上常見的離心柱型的 RNA Kit/總 RNA Kit，不能有效吸附回收miRNA；Trizol 抽提法也不能有效沉淀回收全部 miRNA（生物通上有專題文章闡述）。

適用于提取果實(shí)、種子、中草藥的總 RNA（包括 microRNA 的總 RNA），也可以一次性分別提取出 microRNA 和總 RNA（>200 nt）。

FlashPure Fruit/Seed miRNA Mini Kit 是糖酚含量巨豐富、次級(jí)代謝產(chǎn)物巨多的果實(shí)、種子、中草藥等樣本 microRNA 提取的最jia選擇，還可以提取絕大多數(shù)復(fù)雜植物如棉花、楊樹、冬青、月季、丹參等 microRNA，當(dāng)然本試劑盒也適用于擬南芥、水稻、小麥、煙草、水稻等各種簡(jiǎn)單樣品。

產(chǎn)品特點(diǎn)

本公司生產(chǎn)的 FlashPure Fruit/Seed miRNA Mini Kit 質(zhì)量?jī)?yōu)異，解決了很多果實(shí)、種子、中草藥等復(fù)雜植物 miRNA 難以成功提取的世紀(jì)難題。

注意事項(xiàng)

1. 如果 FSL 有析出或者沉淀，請(qǐng)將其置于 65℃水浴中，重新溶解后使用。

2. Wash Solution 2/3 加入乙醇使用幾天后，可能出現(xiàn)沉淀晶體，并不影響使用，取其上清使用即可。

3. 所有離心步驟均需要在室溫（15~37℃）下進(jìn)行。

4. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)影響 RNA 的提取得率和質(zhì)量。

操作步驟：

重要提示：

① 第一次使用前，請(qǐng)先在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3 中加入無水乙醇，加入體積詳見瓶上的標(biāo)簽。

② 操作前，取 1 ml 裂解液 FSL 至 2 ml 離心管中，加入 5%的 β-巰基乙醇（例如 1 ml FSL 加 50 μl β-巰基乙醇），顛倒混勻后，65°C 水浴預(yù)熱。

多個(gè)樣本請(qǐng)按比例放大。

③ β-巰基乙醇是裂解液 FSL 的關(guān)鍵成分，必要的時(shí)候，可以提高終濃度到10~20%，來防止樣品褐化。如果碰到特別復(fù)雜的植物，可以嘗試在裂解液中再加入 PVP40 至終濃度 2%。

1. 材料處理：

a．在液氮中研磨植物組織成細(xì)粉，轉(zhuǎn)移 30～200 mg 細(xì)粉至 65℃預(yù)熱的裂解液 FSL（已加有 β-巰基乙醇）中，立即劇烈渦旋震蕩 30 Sec，充分混勻。

注意：水分多的樣品（如草莓、西瓜果肉）投入 150～200 mg；水分含量少的樣品（如成熟的小麥/玉米/大豆種子）投入 30～40 mg；淀粉含量高的塊莖投入 40～80mg；葉片投入 50～100 mg。

b．短暫回放至 65℃水浴 5 min，中間偶爾顛倒 1-2 次，幫助裂解。

c． 將裂解物 13,000 rpm 離心 5～10 min，沉淀不能裂解的碎片。

d．轉(zhuǎn)移上清有 800～900 μl。

2. 小心吸取 600 μl 裂解物上清轉(zhuǎn)入一個(gè) gDNA 過濾器中（過濾器放入收集管中），13,000 rpm 離心 1 min，保留濾液（RNA 在濾液中），并把濾液轉(zhuǎn)移至一個(gè) RNase-Free 離心管中，備用。 把 gDNA 過濾器放入空收集管，再把剩余的上清轉(zhuǎn)入 gDNA 過濾器，再次 13,000 rpm 離心1 min，保留濾液備用。

3. 向兩管濾液中分別加入 1.25 倍體積的無水乙醇 (例如：600 μl 濾液加750 μl 無水乙醇)，吹打混勻。

4. 每次轉(zhuǎn)移≤750 μl濾液混合液至RNA吸附柱中，13,000 rpm離心1min，此時(shí) RNA 被吸附在膜上，倒棄濾液。重復(fù)此過程，直到溶液全部上柱。

5. 加入 700 μl Wash Solution 1（檢查是否已加入乙醇!），室溫放置 1 min,13,000 rpm 離心 30 sec，棄濾液。

6. 加入 500 μl Wash Solution 2/3（請(qǐng)檢查是否已加入無水乙醇!），13,000 rpm 離心 30 sec，棄濾液。

7. 重復(fù)步驟 6。

8. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上殘留的乙醇。

9. 取出 RNA 吸附柱，放入一個(gè) RNase-free 1.5 ml 離心管中，向吸附膜的中央懸空滴加 30～50 μl 的 RNase-free H2O，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min，管底即包含 miRNA 的總 RNA。

10. 提取的 RNA，可直接用于下游實(shí)驗(yàn)，或于-70℃保存，以免降解。

相關(guān)產(chǎn)品：

71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加尾法）

71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR，加尾法）

71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25 + 71419-500）

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