Blood Genomic DNA Midi Kit

諾博萊德中量血液基因組DNA 提qu試劑盒（溶液型）

 中量全血基因組DNA提qu試劑he 核酸提取

目錄號:40013

產(chǎn)品內(nèi)容：

自備試劑：

異丙醇、70％乙醇

保存條件：

室溫（15~25℃）

蛋白酶 K，室溫可保存 6 個月，4℃保存 12 個月，~ 20℃保存 2 年。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介：

適用于從新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液樣本中快速提取高質(zhì)量的基因組DNA，也可以提取白膜層和血凝塊。

首先紅細(xì)胞裂解液裂解去除不含DNA的紅細(xì)胞，細(xì)胞核裂解液裂解白細(xì)胞釋放出基因組DNA， 然后蛋白沉淀液選擇性沉淀去除蛋白，最后純凈的基因組DNA通過異丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 簡便快速：30 min 內(nèi)可獲得高純度的基因組 DNA。

2. 安全無毒：無需苯fen/氯仿抽提。

3. 高產(chǎn)：典型的產(chǎn)量 3 ml 全血可提取出 50～150µg 基因組 DNA。

4. 高純：OD260/280=1.7～1.9，長度可達(dá) 50～150 kb，可直接進(jìn)行可直接用于構(gòu)建文庫、PCR、、酶切、Southern-blot 等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

注意事項：

1. 本試劑盒可運(yùn)用于多種抗凝劑的全血，如 EDTA、檸檬酸、肝素抗凝血。其中由于肝素抗凝血的白細(xì)胞沉淀團(tuán)很難打散重懸，影響裂解效果，建議選用非肝素的抗凝劑收集血液標(biāo)本。

2. 為了優(yōu)良效果，zui hao使用新鮮血液標(biāo)本或者4℃存放少于3天的標(biāo)本，不要使用反復(fù)凍融超過3次的標(biāo)本，否則會嚴(yán)重降低產(chǎn)量。

3. 不同樣品尤其疾病樣品中白細(xì)胞數(shù)量差異可能非常大，血液DNA產(chǎn)量的個體差異也可能非常大。

4. 如果結(jié)合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，搖勻后使用。

5. 本試劑盒為溶液型，可以很容易的按照比例擴(kuò)大或者縮小每次處理的全血量（20µl-10ml），請聯(lián)系我們索取其它處理量的操作手冊。

6. DNA溶解液是TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），長期保存DNA，但是EDTA可能下游酶切反應(yīng)，使用時可以適當(dāng)稀釋。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保批pH大于7.5， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在－20℃。

操作步驟：

使用前，請先用去離子水將 10x 紅細(xì)胞裂解液稀釋 10 倍到 1x。

1. 吸取 15 ml 1x 紅細(xì)胞裂解液到一個 15 ml 離心管。

2. 將抗凝全血（使用前恢復(fù)至室溫）顛倒混勻后，吸取 3 ml 加到上一步裝有紅細(xì)胞裂解液的離心管中，顛倒 6-8 次，并倒置輕彈管壁，確保充分混勻。

3. 室溫放置 10 min（期間應(yīng)該顛倒輕彈，混勻數(shù)次幫助裂解紅細(xì)胞）。

4. 2,500 xg 離心 2 min，倒棄紅色上清，并小心的盡可能多的吸棄上清，留下完整的管底白細(xì)胞團(tuán)和大約 50 μl 的殘留上清。

注意：離心后在管底應(yīng)該見到白色的白細(xì)胞團(tuán)，也可能有一些紅細(xì)胞殘片和白細(xì)胞團(tuán)在一起，但是如果看到的是大部分的紅色細(xì)胞團(tuán)，說明紅細(xì)胞裂解很不充分，應(yīng)該再加入適量紅細(xì)胞裂解液重懸細(xì)胞團(tuán)后，重復(fù)步驟 3，4。

5. 渦旋振蕩直到白細(xì)胞團(tuán)充分重懸、分散。

注意：白細(xì)胞的重懸分散對下一步裂解非常重要，白細(xì)胞未打散就加入細(xì)胞核裂解液，會導(dǎo)致白細(xì)胞不能充分裂解，形成肉眼可見團(tuán)塊。

6. 加入3ml 細(xì)胞核裂解液到重懸的白細(xì)胞，上下吹打裂解白細(xì)胞，或者劇烈渦旋 10 sec 幫助裂解白細(xì)胞。

7. (可選步驟，一般不需要) 在裂解物中加入 RNase A（10 mg/ml）至終濃度 30 μg/ml，顛倒 25 次混勻，37℃溫育 15 min 去除殘留 RNA，然后冷卻回室溫。

8. 加入1ml 蛋白沉淀液后，渦旋振蕩 25 sec, 充分混勻，可能見到一些小的蛋白團(tuán)塊。

9. 2,500 xg 離心 5 min。這時候應(yīng)該可以見到管底暗褐色的蛋白沉淀，也可能見到一些蛋白沉淀漂浮在液體表面。

10. 小心吸取上清（大約 3 ml）到一個新的 1.5 ml 離心管中。

注意：吸取上清時，注意不要吸到管底和漂浮在液體表面的蛋白沉淀。如果不小心將蛋白沉淀轉(zhuǎn)入新的離心管中，可再次離心 2 min 后取上清。

11. 加入等體積的室溫異丙醇（3 ml），輕柔顛倒 30 次混勻或者直到出現(xiàn)棉絮狀（絲狀）白色 DNA 沉淀。

12. 2,000 xg 離心 3 min，在管底可以見到白色 DNA 沉淀塊，倒棄上清。

13. 加入 3ml 70％乙醇，顛倒幾次漂洗 DNA 沉淀，2,000 xg 離心 1 min，倒去上清（注意不要把 DNA 沉淀倒掉了），倒置后在吸水紙上輕敲幾下以控干殘留乙醇，還可以用槍頭小心吸掉管底沉淀周圍和管壁的殘留乙醇，空氣晾干沉淀幾分鐘。

注意：不要干燥過頭，否則 DNA 極其難溶；也不能殘留太多乙醇，否則乙醇可能抑制下游如酶切反應(yīng)。

14. 加入 250 μl DNA 溶解液重新溶解 DNA 沉淀，輕彈管壁混勻，可以放置在 65℃溫育 30-60 min（不要超過一小時），期間不時的輕彈管壁幫助重新水化DNA。也可以在室溫或者 4℃放置過夜來重新水化 DNA。

15. DNA 可以存放在 2-8℃，如果要長時間存放，可以放置在－20℃。

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