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上海語純生物科技有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10 ×50ul/100×50ul |
|---|---|---|---|
| 貨號 | EC96305 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產業(yè),制藥/生物制藥 |
產品貨號：EC96305
產品規(guī)格：10 ×50ul/100×50ul
本產品僅供科學研究或進一步生產使用，不可用于臨床診斷或治療。
產品介紹
GV3101（pSoup）（電轉）
產品簡介
GV3101(pSoup)菌株為 C58 型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因
Rif，為了便于轉化操
作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的胭脂堿型 Ti質粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此質粒含有 vir基因 (vir
基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)質粒自身的 T-DNA 轉移功能被破
壞，但可以幫助轉入的雙元載體 T-DNA 順利轉移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型 Ti 質粒含有篩選標簽：
Gent，賦予 GV3101 菌株慶大霉素抗性；在 GV3101 菌株中轉入 help 質粒：pSoup 即為 GV3101(pSoup)
菌株，可幫助 pGreen，62SK，pGs2 系列質粒在農桿菌中復制，同時賦予該菌株四環(huán)素（Tet）抗性。適
用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉基因操作。本公司開發(fā)的 GV3101(pSoup)電轉感受態(tài)特別適
用于大質粒的轉化：經 pGs2(卡那霉素抗性)質粒檢測轉化效率>105 cfu/μg DNA。
產品組成
組分
GV3101（pSoup）
電轉感受態(tài)細胞
10 × 50μL
100 × 50μL
定制
基因型：C58 (RifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( GentR) Nopaline(pSoup-TetR)
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除胭脂堿型 Ti 質粒 pMP90 和 pSoup 質粒外，無外源質粒 DNA 殘留；
電轉法轉化效率≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 將新的 2 mm 電擊杯插入冰中預冷；或者將儲存于 75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出，在超凈工
作臺中將其倒置于干凈的吸水紙上，使乙醇充分揮發(fā)，然后插入冰中預冷；
2. 取-80℃保存的農桿菌感受態(tài)插入冰中待其融化，加入 0.01-1μg 質粒 DNA（體積不大于 5μl），用
200μl 槍頭將感受態(tài)-質?；旌衔锟焖俎D移到預冷的電擊杯中，蓋上杯蓋；
3. 開啟電轉儀，設置參數(shù)（2500 V ，200 Ω，25μF），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成后快速插
入冰中，加入 900 μl 無抗生素的 YEB 并將感受態(tài)細胞轉移到無菌空管中，28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時。
（注：此電轉化參數(shù)為 Bio-rad 推薦，使用者也可使用電轉儀所推薦的 Protocol 進行操作）
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100μl 左右上清將菌體輕輕吹勻，并涂布于含相應抗生素的 YEB 平板
上，倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2~3 天（當平板只含有 50μg/ml Kan 時，28℃培養(yǎng) 48 h 即可；平板中同時
加入 50μg/ml Kan，20μg/ml Rif 時，需 28℃培養(yǎng) 60 h；如果使用的平板含有 50μg/ml Rif 時，則需要 28 ℃
培養(yǎng) 72~90 h）。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞解凍后應立即使用；
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態(tài)細胞體積的 1/10；
3. 利福平濃度不應高于 25μg/μl，利福平濃度過高不利于農桿菌生長，會降低其生長速度和轉化效率。
4. 由于 Ti 質粒丟失的概率極低（可以忽略），所以相關抗性基因可以不用添加。
GV3101（pSoup）（電轉）
