聯(lián)系電話
上海語(yǔ)純生物科技有限公司
初級(jí)會(huì)員·1年CC96402Y1HGold Chemically Competent Cell
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- CC96402 產(chǎn)品型號(hào)
- 語(yǔ)純生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：44更新時(shí)間：2025-04-24 10:14:35
聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說(shuō)明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息，謝謝!
- 聯(lián)系人：
- 語(yǔ)純生物
- 電話：
- 手機(jī)：
- 15316728970
- 地址：
- 遠(yuǎn)著大廈 八樓 1087
- 網(wǎng)址：
- www.ycswcell.com/
掃一掃訪問(wèn)手機(jī)商鋪
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10 ×100ul/100×100ul |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | CC96402 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
產(chǎn)品貨號(hào)：CC96402
產(chǎn)品規(guī)格：10 ×100ul/100×100ul
本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用，不可用于臨床診斷或治療。
產(chǎn)品介紹
Y1HGold Chemically Competent Cell
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Y1HGold 菌株是 Clontech 公司開(kāi)發(fā)的 GAL4-AbA 酵母單雜系統(tǒng)用菌株，MATα 型，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)
粒進(jìn)行篩庫(kù)試驗(yàn)。Transformation marker 為：ura3，leu2；報(bào)告基因?yàn)椋?/span>AbAr。Y1HGold-GAL4-
AbA 酵母單雜系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用：pAbAi 和 pGADT7。質(zhì)粒 pAbAi 的篩選標(biāo)志為 URA，
用于表達(dá) pBait-AbAi construct (1~3 個(gè) bait DNA 序列重復(fù)串聯(lián)后克隆到 pAbAi 中)；質(zhì)粒 pGADT7
的篩選標(biāo)志為 LEU，用于表達(dá) AD(GAL4 C 端 768 ~ 881 位氨基酸)與目標(biāo)蛋白 (Prey)的融合蛋白。
GAL4-AbA 酵母單雜系統(tǒng)原理：Aureobasidin A (AbA)是一 種環(huán)酯肽抗生素，在低濃度 (0.1-0.2
µg/ml)下即可對(duì)酵母產(chǎn)生毒性?；蚪M中整合了 pBait-AbAi 的酵母菌株 (Bait-Reporter Yeast Strains)，
當(dāng)獵物蛋白 (Prey)結(jié)合到誘餌序列 (Bait DNA)上，GAL4 AD 就會(huì)激活 AbAr 的表達(dá)，從而能夠在含
有抗生素 AbA 的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。AbAr 與營(yíng)養(yǎng)缺陷報(bào)告基因相比具有更低背景的優(yōu)點(diǎn)，可以降低酵
母單雜假陽(yáng)性發(fā)生的概率。Y1HGold 感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，-80℃可保存三個(gè)月，pGADT7
質(zhì) 粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組分
名稱
規(guī)格
儲(chǔ)存方式
Y1HGold Competent Cell
100 μl /支
-80℃（3 個(gè)月）
pGADT7 (control vector, 10 ng/μl)
10 μl
-80℃（12 個(gè)月）
Carrier DNA (10 μg/μl)
100 μl
-20℃（12 個(gè)月）
PEG/LiAC
5 ml
4℃（12 個(gè)月）
基因型： MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met-, MEL1
使用方法：
● 操作方法
1. 取 100 µl 冰上融化的 Y1HGold 感受態(tài)細(xì)胞，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒 2-5 µg，Carrier DNA(95-
100℃， 5min，快速冰浴，重復(fù)一次) 10 µl，PEG/LiAc 500 µl 并吸打幾次混勻，30℃水浴 30 min
(15 min 時(shí)翻轉(zhuǎn) 6-8 次 混勻)。
2. 42℃水浴 15 min (7.5 min 時(shí)翻轉(zhuǎn) 6 - 8 次混勻)。
3. 5000 rpm 離心 40 s 棄上清，ddH2O 400 µl 重懸，離心 30 s 棄上清。
4. ddH2O 50 µl 重懸，涂板，29℃培養(yǎng) 48 - 96 h。
● 培養(yǎng)基配制
① YPDA (1L): Tryptone 20 g ，Yeast extract 10 g ，0.2% adenine 15 ml 補(bǔ)水到 950 ml，用鹽酸調(diào)
pH 到 6.5； Agar 20 g(for plates only) 121℃，15 min 高壓滅菌； 待培養(yǎng)基溫度降到 55℃時(shí)，加入
已過(guò)濾的 40% 葡萄糖 50 ml。
② SD medium (1L): Yeast Nitrogen base 6.7 g ，葡萄糖 20 g ，Dropout 適量（按說(shuō)明書(shū)） 補(bǔ)水到 1L，
調(diào) pH 至 5.8； Agar 20 g(for plates only) 121℃，15 min 高壓滅菌。
③ 0.2% adenine (1L): Adenine 2 g,，補(bǔ)水到 1L；溶解后高壓滅菌或 0.22 µm 濾膜過(guò)濾除菌。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。
2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
3. 同時(shí)轉(zhuǎn)化 2 - 3 種質(zhì)粒時(shí)可增加質(zhì)粒的用量。
4. Y1HGold 酵母菌株對(duì)高溫敏感，最適生長(zhǎng)溫度為 27 - 30℃；高于 31℃，生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率呈
指數(shù)下降。
5. 菌落變粉不是污染，是酵母細(xì)胞生長(zhǎng)中一個(gè)常見(jiàn)現(xiàn)象。當(dāng)細(xì)胞在平板培養(yǎng)幾天后，平板上的
Adenine 被酵母消耗完畢，酵母試圖通過(guò)自身代謝途徑合成 Adenine 以供利用，然而，有些菌株的
ADE2 基因被破壞，Adenine 合成途徑受阻；又由于其 ADE4,5,6,7,8 基因均正常，所以造成中間產(chǎn)
物 P-ribosylamino imidazole (AIR) 在細(xì)胞中積累而使菌落變?yōu)榉奂t色。
6. 酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長(zhǎng)速度比 YPDA 培養(yǎng)基慢，培養(yǎng)基中缺陷成分越多，生長(zhǎng)越慢，以轉(zhuǎn)化涂
板為例：涂 YPDA 平板 29℃，48 h 培養(yǎng)可見(jiàn)直徑 1 mm 克??；涂 SD 單缺平板 29℃，48 - 60 h 培養(yǎng)
可見(jiàn)直徑 1 mm 克隆，涂 SD 雙缺平板 29℃，60 - 80 h 培養(yǎng)可見(jiàn)直徑 1 mm 克隆，涂 SD 三缺或四缺
平板平板 29℃，80 - 90h 培養(yǎng)可見(jiàn)直徑 1 mm 克隆
Y1HGold Chemically Competent Cell
相關(guān)產(chǎn)品
