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諾博萊德 脂肪組織蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-直接濾除液態(tài)脂肪

脂肪組織蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號：P5096

產(chǎn)品名稱：脂肪組織蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-直接濾除液態(tài)脂肪

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：脂肪組織蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-直接濾除液態(tài)脂肪

規(guī)格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5096 脂肪組織蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-直接濾除液態(tài)脂肪

脂肪組織蛋白提取試劑盒適用于從脂肪組織和各種脂肪含量高的實(shí)體組織和細(xì)胞，如脂肪細(xì)胞、脂肪肝細(xì)胞、腦、脂肪、脂肪肝臟、結(jié)締組織、胸腺組織等動物組織中提取可溶性總蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含SDS、TritonX-100、chaps等可能影響質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的組份，最后得到的蛋白質(zhì)樣品經(jīng)過透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑、高濃度鹽等影響，基本可以滿足下游任意的蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。本產(chǎn)品的蛋白酶抑制劑混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF導(dǎo)致的質(zhì)譜峰漂移，因此使用本產(chǎn)品提取的蛋白樣品可以用于質(zhì)譜(MassSpectrometry,MS)檢測和分析，蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)等相關(guān)研究。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

適用樣本：動物組織

注：

1. 蛋白提取液A2、蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 避免反復(fù)凍融。

3. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

4. 試劑拆封后請盡快使用完！

產(chǎn)品簡介：

脂肪組織蛋白提取試劑盒適用于從脂肪組織和各種脂肪含量高的實(shí)體組織和細(xì)胞，如脂肪細(xì)胞、脂肪肝細(xì)胞、腦、脂肪、脂肪肝臟、結(jié)締組織、胸腺組織等動物組織中提取可溶性總蛋白。提取過程簡單方便，可在 1 小時(shí)內(nèi)完成。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含 SDS、Triton X-100、chaps 等可能影響質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的組份，最后得到的蛋白質(zhì)樣品經(jīng)過透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑、高濃度鹽等影響，基本可以滿足下游任意的蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。

本產(chǎn)品的蛋白酶抑制劑混合物中不含 AEBSF，可以避免由于 AEBSF 導(dǎo)致的質(zhì)譜峰漂移，因此使用本產(chǎn)品提取的蛋白樣品可以用于質(zhì)譜(Mass Spectrometry,MS)檢測和分析，蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)等相關(guān)研究。

本試劑盒提取的蛋白也可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒所配蛋白脫脂肪離心柱可以用來濾除蛋白質(zhì)溶液中的液態(tài)脂滴，對蛋白質(zhì)無吸附。蛋白脫脂柱可以重復(fù)利用。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿機(jī)/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒、PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒、離心管、吸頭、一次性手套。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

2、提取過程簡單方便，將蛋白提取的時(shí)間縮短至 30 分鐘-1 小時(shí)。

3、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4、紫外檢測蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

5、總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白和膜蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。

6、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 5種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑 Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

2. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

二、脂肪組織蛋白提取：

1. 提取液制備：

根據(jù)待處理樣品數(shù)量，將試劑 A1 和試劑 A2 按 9：1 混合，配成蛋白提取液 A，充分混勻備用。

每 500μl 蛋白提取液中加入 2μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 蛋白樣品用于測定某些細(xì)胞內(nèi)蛋白酶、磷酸酶活性等下游實(shí)驗(yàn)時(shí)，注意根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整抑制劑混合物是否加入。

4) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2. 取 100-200mg 組織樣本剪碎，加入 500μl 蛋白提取液 A，用組織勻漿器/勻漿機(jī)充分勻漿。

【注】：

1) 如果組織樣品很細(xì)小，可以剪碎后直接加入提取液振蕩 15-30 分鐘，可以不用勻漿器。

2) 也可用液氮研磨的方法，常規(guī)操作即可。

3. 將組織勻漿吸入一預(yù)冷的干凈離心管中，在 4℃條件下振蕩 15-30 分鐘。

【注】：

1) 用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體稍微晃動即可。

2) 沒有振蕩條件可以不振蕩，置 4℃靜置即可，稍微延長時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

4. 將振蕩處理過的勻漿液在 4℃，12000×g 條件下離心 15 分鐘，棄沉淀，收集上清。

5. 將上清吸入蛋白脫脂離心管內(nèi)管中，套上液體收集管，在 4℃，10000-12000×g 條件下離

心 10-15 分鐘。

【注】：

1) 蛋白脫脂離心管可以重復(fù)利用，一般一個(gè)離心管可以用 5-20 次。

2) 提取液液面有大量脂肪層時(shí)，建議可以先用移液器吸除脂肪層，有利于延長脫脂柱使用壽命，增加使用次數(shù)。

3) 如果內(nèi)管中液體不容易離心下來時(shí)，可以將離心力提高到 16000×g 離心 15 分鐘。

6. 將液體收集管中的液體吸入另一干凈離心管，即可得到蛋白樣品。

【注】：

1) 蛋白脫脂離心管內(nèi)管和外管用 PBS 洗滌后，用于下一個(gè)樣品。

7. 將蛋白樣品透析處理或者脫鹽柱脫鹽處理后用于下游實(shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 蛋白樣品中含有鹽，需要脫鹽處理后用于雙向電泳。

2) 經(jīng)透析或脫鹽離心柱處理的蛋白樣品不含有去垢劑和高濃度鹽。

8. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理

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