過氧化氫酶(CAT)活性檢測(cè)試劑盒 抗逆系列 返回列表頁(yè)

諾博萊德 過氧化氫酶(CAT)活性檢測(cè)試劑盒 Catalase(CAT) Activity Assay Kit

過氧化氫酶(CAT)活性檢測(cè)試劑盒   抗逆系列

產(chǎn)品貨號(hào)：BC8088

產(chǎn)品名稱：過氧化氫酶(CAT)活性檢測(cè)試劑盒 Catalase(CAT) Activity Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：過氧化氫酶(CAT)活性檢測(cè)試劑盒

英文名稱：Catalase(CAT) Activity Assay Kit

規(guī)格：50T/48S

檢測(cè)方法：紫外分光光度法 Spectrophotometer

儲(chǔ)存條件：Store at 2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder BC8088過氧化氫酶(CAT)活性檢測(cè)試劑盒 Catalase(CAT) Activity Assay Kit

CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是最主要的H₂O₂清除酶，在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。

H₂O₂在240nm下有特征吸收峰，CAT能夠分解H₂O₂，使反應(yīng)溶液240nm下的吸光度隨反應(yīng)時(shí)間而下降，根據(jù)吸光度的變化率可計(jì)算出CAT活性。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn))

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣本的制備

a、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清:按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液

體積(mL)為500-1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液)，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率200w,

超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次):8000g4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。

b、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5-10的比例(建議稱取約0.1g組織，加入1mL提液)，進(jìn)行冰浴勻漿。8000g4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清(漿)樣本:直接檢測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至240nm處，蒸餾水調(diào)零。

2、測(cè)定前將CAT檢測(cè)工作液37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其他物種)水浴10min。

3、取 1mLCAT檢測(cè)工作液于1mL石英比色皿中，再加入35μL樣本，混勻5s；室溫下立即測(cè)定240nm 下的初始吸光值A(chǔ)1和1min后的吸光值A(chǔ)2。計(jì)算AA=A1-A2。

三、CAT 活性計(jì)算

1、血清(漿)CAT活力的計(jì)算:

單位的定義:每mL血清(漿)在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmolH2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(U/mL) =[ΔAxV 反總+ (εxd) x103]+V 樣+T=678xΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中CAT活力計(jì)算:

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmolH2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(U/mg prot) =[4AxV 反總÷ (εxd) x106]÷ (V 樣xCpr) +T=678xΔA+Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算:

單位的定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmol H2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(U/g質(zhì)量)=[ΔAxV 反總÷(εxd) x106]÷ (WxV 樣+V 樣總)+T=678xΔA÷W

3、按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算:

單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmol H2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT (U/10* cell) =[ΔAxV 反總÷ (εxd) x106]÷ (500xV 樣÷V 樣總)+T=1.356xΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積，1.035x103L;ε:H2O2摩爾吸光系數(shù)，43.6 L/mol/cm:d:1mL石英比色皿光徑，lcm;V樣:加入樣本體積，0.035mL;V樣總:加入提取液體積，1mL;T:反應(yīng)時(shí)間，1min:W:樣本質(zhì)量，g;Cpr:上清液蛋白濃度，mg/mL;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬(wàn);106:單位換算系數(shù)，1mol=106umol。

注意事項(xiàng):

如果反應(yīng)液有大量氣泡產(chǎn)生，將樣本用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

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BC8088過氧化氫酶(CAT)活性檢測(cè)試劑盒 Catalase(CAT) Activity Assay Kit 50T/48S