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諾博萊德 Caspase-4活性檢測試劑盒Caspase-4 Activity Assay Kit

Caspase-4活性檢測試劑盒 細胞凋亡檢測方法

產(chǎn)品貨號：BC1628

產(chǎn)品名稱：Caspase-4活性檢測試劑盒Caspase-4 Activity Assay Kit

英文名稱：Caspase-4 Activity Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T/20T

產(chǎn)品簡介：

檢測方法：比色法 Colorimetric

儲存條件：Store at -20℃，6 months

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyderBC1628 Caspase-4活性檢測試劑盒Caspase-4 Activity Assay Kit是參與細胞凋亡過程的蛋白酶家族，包含10多個成員。Caspase-4可以和 Apaf-1相互作用，并參與細胞se素c導致的Caspase-3激活，也可以和 caspase-14 相互作用。試劑盒測定原理基于Caspase-4特異水解其多肽底物 AC-LEVD-pNA,釋放出游離的硝基苯胺 pNA，后者呈黃色在 405nm 具有最大吸收峰，采用可見光光度比色法測定。適用于檢測哺乳動物組織、細胞 Caspase-1活性。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、100uL 玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻)

1、培養(yǎng)細胞:先收集細胞到離心管，離心后棄上清;按照細胞數(shù)量(約106個)加100L試劑二(若裂解不充1.分可提高至 150-200μL)，震蕩重懸沉淀，置冰上靜置15 min，15000g4℃離心 10-15min，取上清置冰上待測。

2、組織按照組織質(zhì)量(g):試劑二體積(mL)為1:5-10的比例(建議稱取約01g組織，加入1mL 試劑二)冰浴研磨或充分剪碎，置冰上靜置15min，4℃，15000g離心10-15min，取上清置冰上待測。

二、測定步驟

1、可見分光光度計/酶標儀預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至405nm，分光光度計蒸餾水調(diào)零。2、標準溶液的稀釋:將5mmolL pNA 標準品用標準品稀釋液稀釋至 200、100、50、25、12.5、0umolL 的標準溶液備用。

注意事項:

1、由于試劑二中含有還原劑(DTT)，建議將樣本用水稀釋2倍后，用Bradford法測定蛋白濃度，以降低 DTT對蛋白濃度測定的干擾。不建議使用BCA法測定蛋白濃度。

2、Caspase 活性測定值低最常見的原因是細胞未發(fā)生凋亡或細胞量太少，其次是觀測時間不恰當。誘導凋亡時，2并非劑量越大時間越長 Caspase 活性就越高。建議設置不同劑量和時間點如0、2、4、8、16、24小時，以檢測最佳的觀察點。

3、所測樣本的值高于標準曲線上xian時，可用試劑二稀釋樣本后重新測定。

4、蓋緊 96孔板蓋子并用封口膜密封。37℃孵育，肉眼可見顏色變黃時的 OD405值約為0.2，此時即可測定。顏色變化不明顯可延長反應或過夜，但酶活性較強時，孵育時間過長將導致反應失去線性關系。

Caspase-4活性檢測試劑盒 細胞凋亡檢測方法

產(chǎn)品訂購信息

BC1628 Caspase-4活性檢測試劑盒Caspase-4 Activity Assay Kit 50T/100T/20T