產(chǎn)品簡介：

包涵體（Inclusion Body）是指超表達的蛋白在宿主細胞胞漿內(nèi)（如果超表達的是胞漿蛋白）或膜間內(nèi)（如果超表達的是分泌蛋白）凝集形成的無活性的固體顆粒。包涵  體形成的主要原因是在重組蛋白的表達過程中缺乏某些蛋白折疊輔助因子，或環(huán)境不適   導(dǎo)致無法形成正確的蛋白質(zhì)次級鍵。由于包涵體主要由超表達的重組蛋白質(zhì)組成，因此   分離純化包涵體是分離純化具有活性的重組蛋白的第一步。本產(chǎn)品就是用于快速地從大  腸桿菌宿主中提取高質(zhì)量的包涵體的試劑盒。

產(chǎn)品特點：

1.操作簡單快速，整個過程只要三十分鐘左右。

2.微量純化，可以在 1.5mL 離心管中完成。

3.能有效去除包涵體中的細胞壁和細胞膜等非重組蛋白成份，使重組蛋白所占比重達到 60%以上。

4.主要用于細菌表達系統(tǒng)，也可用于真菌和真核表達系統(tǒng)，但用戶需要自行摸索條件。

5.可以選擇鹽酸胍和尿素兩種蛋白溶解方式。

6.得到的包涵體溶解液可以用于重折疊、SDS-PAGE 或其他純化處理。

7.微量包涵體純化試劑盒足夠 20 次微量純化。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

保存和運輸

常溫運輸和保存、溶菌-酶和 Benzonase 需要低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。無

自備試劑

無

使用方法：

一：超聲法菌

1.在蛋白誘導(dǎo)期結(jié)束時，轉(zhuǎn)移 1.5 mL 菌液到一個干凈的塑料離心管中。最好同時用不加誘導(dǎo)物的細菌做平行對照實驗。

2.12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，小心棄上清。沉淀（約 10 mg）放冰上待用或放-80℃保存。

3.加入 250 uL 冰浴的包涵體純化溶液 A，冰上超聲裂解菌體直到在顯微鏡下看見絕大多數(shù)細胞破裂。超聲參數(shù)需根據(jù)儀器型號自行摸索，但裂解物必須不粘稠，否則不  容易沉淀包涵體。

4.直接進入第 14 步。

二：酶法裂菌

5.一次微量提取需要 250uL 包涵體純化溶液 A，用前取包涵體純化溶液 A，按每 mL 加入 120mg 溶菌-酶的比例加入所需量的溶-菌酶并搖晃溶解待用。溶菌-酶的溶液非常容易衰變，所以最好現(xiàn)配現(xiàn)用，沒用完的只能在-20℃放一周。

6.包涵體中的重組蛋白一般比溶解狀態(tài)中的蛋白質(zhì)更能夠抵抗微量內(nèi)源性蛋白水解  酶的降解，但如果實驗發(fā)現(xiàn)得到的重組蛋白確有降解，則需要在包涵體純化溶液 A 中新鮮加入自備的蛋白酶抑制劑混合物。

7.在蛋白誘導(dǎo)期結(jié)束時，轉(zhuǎn)移 1.5 mL 菌液到一個干凈的塑料離心管中。最好同時用不加誘導(dǎo)物的細菌做平行對照實驗。

8.12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，小心棄上清。

9.加入 250 uL 含溶菌-酶的包涵體純化溶液 A 重懸細胞。

10.室溫放置 20 分鐘裂解細菌，其間可以用手輕彈離心管混勻。

11.-20℃冷凍至凝固。注意：一定要凝固到細菌溶液變成固體為止。

12.室溫水浴解凍。如果裂解充分，細菌釋放出的 DNA 將使裂解物十分粘稠。如果不粘稠，說明裂解不充分，需要重復(fù)凍融步，否則完整細菌將和包涵體一起沉淀，影  響包涵體的純度。最好在顯微鏡下檢查細菌是否充分裂解。

13.加入 1 uL Benzonase 溶液(1U/uL)，脫色搖床上搖晃直到裂解液不再粘稠，一般需要 30 分鐘左右，否則還需要延長保溫時間。

14.12,000 rpm 4℃離心 5 分鐘，留存上清作為 SDS-PAGE 的對照樣品一。

15.將沉淀（包涵體）懸浮在 1 mL 的包涵體純化溶液 B 中，室溫放置 5 分鐘。

16.12,000 rpm 4℃離心 10 分鐘，留存上清作為 SDS-PAGE 的對照樣品二。

17.將沉淀（包涵體）懸浮在 1mL 的包涵體純化溶液 B 中，室溫放置 5 分鐘。

18.12,000 rpm 4℃離心 10 分鐘，留存上清作為 SDS-PAGE 的對照樣品三。本產(chǎn)品提供的包涵體純化溶液 B 足夠兩次洗滌（兩次洗滌一般可得到足夠純凈的包涵體）。如果需要更多洗滌，用戶需要單獨購買包涵體洗滌液（溶液 B）。

19.沉淀為純化的包涵體，可以長期放置在冰箱待用或直接用于包涵體溶解。

三：包涵體的溶解：

20.在包涵體沉淀中加入 250 uL 包涵體溶解液，用槍頭充分吹打后漩渦震蕩室溫放置 1 小時使蛋白質(zhì)充分溶解。脫鹽后可以進行 SDS-PAGE 電泳。注意：包涵體溶解液含6M 鹽酸胍，溶解蛋白能力強于含 8M 尿素的溶解液，但 SDS-PAGE 時不能直接上樣?？蛻艨捎米詡涞哪蛩嘏渲?8-10 M 尿素的溶液（尿素溶液不穩(wěn)定，所以不能長期放置）溶解包涵體，得到的溶解液可以直接用于 SDS-PAGE 或后續(xù)純化。但其溶解能力弱于鹽酸胍。

21.20，000g 4℃離心 20 分鐘，小心收集上清，保留不溶性沉淀（未能溶解的包涵體）。上清脫鹽后進行 SDS-PAGE 電泳，檢查是否大部分重組蛋白都在上清中。如果沒有，說明包涵體沒有完-全溶解，需要用適當(dāng)增加包涵體溶解液的用量。包涵體純化過程中引入了溶菌-酶、核酸酶 Benzonase 等外源蛋白質(zhì)，在 SDS-PAGE 分析時可能有額外條帶出現(xiàn)。

22.所得蛋白質(zhì)溶液可以用于復(fù)性等試驗。用戶可本公司購買包涵體復(fù)性套裝。

選擇我們的微量包涵體純化試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！