產(chǎn)品簡介：

Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Tricine-SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離多肽的主要方法，但是單獨(dú)配制各種溶液十分繁瑣，為此本公司開發(fā)了 Tricine-SDS-PAGE 電泳試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.一站式，提供除水和樣品以外的所有成分。

2.即開即用，用戶不需單獨(dú)準(zhǔn)備各種成分，十分方便。

3.安全，免去了實(shí)驗(yàn)人員接觸粉末狀的劇毒物品丙烯酰胺。

4.電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實(shí)驗(yàn)。

5.本產(chǎn)品可配 30 塊 mini 膠

6.本試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分 規(guī)格包裝

丙烯酰胺/甲叉雙丙烯

酰胺干粉(19:1)60 g/3 g250 mL 棕色瓶

Tricine-SDS-PAGE

配膠液，3×250 mL250 mL 本色瓶

50%甘油25 mL30 mL 本色瓶

TEMED1.5 mL1.5 mL 棕色管

過硫酸銨1 g1.5 mL 本色管

Tricine-SDS-PAGE上樣緩沖液，2×1 mL×51.5 mL 本色管

Tricine-SDS-PAGE

陽極電泳液（干粉）10 L250 mL 本色瓶

Tricine-SDS-PAGE

陰極電泳液（干粉）10 L塑料熱封袋

使用手冊1 份無

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸和保存（上樣液需要-20℃保存），保存期為一年。

自備試劑

Milli-Q 純水或同等級別的去離子水、水飽和的異丁醇。

使用方法：

本公司強(qiáng)烈推薦在分離多肽時(shí)使用由 4%濃縮膠、10%隔離膠和 16%分離膠從上到下組成的三層 Tricine-SDS-PAGE 膠，下面為配制該膠的流程。如果用戶不需要隔離膠或需要調(diào)整各種膠的濃度，請按比例修改。

1.  配制 30%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液（19：1）(丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液簡稱 AB 溶液，下同)：直接在裝有 60 克丙烯酰胺和 3 克甲叉雙丙烯酰胺的瓶中加入 140 mL 自備的去離子水，擰緊瓶蓋后 37℃水浴， 其間顛倒搖晃多次，直到干粉全部溶解，得到 30% AB 溶液（19：1），

該溶液最好 4℃避光保存，在一個(gè)月內(nèi)用完。AB 溶液具有神經(jīng)毒性，一定要戴手套操作。

2.配制 10%的 APS（過硫酸銨）：按每 0.1 克過硫酸銨干粉加 1 mL 去離子水的比例將去離子水加到裝有硫酸銨干粉的 1.5 mL EP 管中，搖晃到粉末全部溶解。配制好的 10%的 APS 溶液可在 4℃存放一周。過硫酸銨極其容易吸潮，沒用完的過硫酸銨一定要擰緊蓋子。如果吸潮，可用自備  的分析純過硫酸銨替代。

3.配制 30 mL 16%分離膠和 9 mL 10%隔離膠（足夠灌兩塊 0.75 mm× 14 cm×14 cm 膠）。

A)標(biāo)記 2 個(gè) 50 mL 的三角瓶，按下表的用量加入各成分：

B)混勻后真空脫氣 10-15 分鐘。

C)灌分離膠：在分離膠瓶中加入 150 ?L 10%的 APS 溶液和 30 ?L TEMED 溶液，輕輕旋轉(zhuǎn)混勻。用吸管將分離膠溶液沿著一個(gè)隔條的邊緣加到玻璃板夾層中，直到溶液的高度距離玻璃上沿還有 5 cm。由于分離膠比重比隔離膠大，故可在其凝固前直接灌隔離膠。

D)灌隔離膠： 在隔離膠瓶中加入 75 ?L 10% 的 APS 溶液和 15 ?L TEMED 溶液，輕輕旋轉(zhuǎn)混勻。用吸管將積層膠溶液緩緩地沿著一側(cè)隔條邊緣加入到玻璃平板夾層中，直到溶液離玻璃板頂部約 3 cm 高為止。

E)蓋 1cm 高的自備水飽和的異丁醇使膠面跟氧氣隔絕（氧氣會抑制膠的凝固；此處水飽和的異丁醇可用水代替，但效果會差一些）。讓分離膠和隔離膠在室溫聚合 30-45 分鐘。

4.配制 9 mL 4%濃縮膠（足夠灌兩塊 0.75 mm×14 cm×14 cm 膠）。

F)在一個(gè) 50 mL 的三角瓶中，先按下表的用量加入各成分：

成份用量

30%AB 溶液（19：1）1.2 mL

Tricine-SDS-PAGE 配膠液，3×3.0 mL

補(bǔ)去離子水到 9 mL需加 4.8 mL

G)混勻后真空脫氣 10-15 min。

H)將 75 uL 新鮮配制的 10%的過硫酸銨溶液和 15 ?L TEMED 溶液加入到溶液中，輕輕旋轉(zhuǎn)混勻。用吸管將積層膠溶液緩緩地沿著一側(cè)隔條邊緣加入到玻璃平板夾層中，直到夾層中的溶液離玻璃板頂部約1cm 高為止。

I) 插入 0.75 mm 厚的塑料梳子，再補(bǔ)加濃縮膠溶液填滿梳子間的空隙。注意避免產(chǎn)生氣泡。讓濃縮膠在室溫聚合 30-45 分鐘。

5.小心拔出塑料梳子，在上層緩沖槽中加入 1×Tricine-SDS-PAGE 陰極電泳液(下稱陰極電泳液)，并用 1×陰極電泳液沖洗加樣孔。注：本產(chǎn)品提供 10 升的陰極電泳液干粉，將所有干粉溶解在 600-800 mL 去離子水中，最后定容到 1000 mL 即得 10×陰極電泳液，可以室溫放置，不需要滅菌，用時(shí)再用去離子水稀釋 10 倍成 1×陰極電泳液。

6.在電泳裝置的下層緩沖液槽中加入 1×Tricine-SDS-PAGE 陽極電泳液 (下稱陽極電泳液)。注：本產(chǎn)品提供 10 升的陽極電泳液干粉，將所有干粉溶解在 600-800 mL 去離子水中，用自備的濃鹽酸調(diào) pH 到 8.9（25℃） 后定容到 1000 mL 即得 10×陽極電泳液，滅菌后可以 4℃長期放置。用時(shí)再用去離子水稀釋 10 倍成 1×陽極電泳液。

7.在密封的螺蓋微量離心管中，用 2×Tricine-SDS-PAGE 上樣緩沖液按 1： 1 的比例稀釋蛋白樣品，于 100℃煮沸 3-5 分鐘。注意：如果樣品是蛋白沉淀物，則加入 50-100 ?L 新配的 1×Tricine-SDS-PAGE 上樣緩沖液溶解；如果樣品是蛋白稀溶液，可先濃縮蛋白質(zhì)。與 Tricine-SDS-PAGE上樣緩沖液混合后的樣品如未經(jīng) 100℃加熱滅活蛋白酶，切勿放于室溫。

8.上樣。如果用考馬斯亮藍(lán)染色，對于成分復(fù)雜的蛋白質(zhì)樣品，上樣量最好為 20 uL（含 25-50 ?g 總蛋白質(zhì)）；對于只有一種或幾種蛋白質(zhì)的樣品， 上樣量最好為 1-10 ?L。如果用銀染，上樣量可減少 10-100 倍。

9.電泳。先 30 V 恒壓電泳 1 h（對 0.75m

m×14cm×14cm 的膠而言），然后 150 V 恒壓電泳 4-5 h。注：本產(chǎn)品的 Tricine-SDS-PAGE 上樣液使用了考馬斯亮藍(lán) G-250 作為指示劑，其泳動速度比最小的肽還快。

10.終止電泳，取出凝膠進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)處理（最好用銀染染色，節(jié)約樣品）。  注意：考染或銀染時(shí)，基本步驟同蛋白 PAGE 膠染色，只是任何一步（尤其是固定步驟）的處理時(shí)間都不要超過 20 分鐘，否則多肽非常容易擴(kuò)散出 PAGE 膠而降低檢測的靈敏度。

選擇我們的Tricine-SDS-PAGE 配膠液，3×，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！