產(chǎn)品簡介：

本產(chǎn)品是用于多重熒光探針檢測的即用型 qPCR 試劑，可以同時對多個靶片段進行實時定量 PCR 分析（Quantitative PCR, qPCR）。產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液組分、熱啟動 Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2 和穩(wěn)定劑等所有 qPCR 所需要的成分，用戶只需加入基因組 DNA 或 cDNA 模板、引物和探針即可進行探針法 qPCR 反應(yīng)。

產(chǎn)品特點：

1.以 2×Mix 提供，用戶只需準備模板、引物、探針和 ROX 染料（取決于 qPCR 儀器）即可以進行探針法 qPCR 實驗，非常方便快捷，降低了操作誤差。

2.各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化，反應(yīng)的靈敏度高、特異性強。靈敏度最高時可  以達到 50 拷貝/反應(yīng)（跟模板質(zhì)量，引物設(shè)計等相關(guān)）。

3.既可用于 TaqMan 探針 qPCR，也可用于分子信標探針 qPCR。

4.靈敏度和專一性比染料法 qPCR 更高。

5.UNG 防污染檢測系統(tǒng)：添加 UNG（Uracil N-Glycosylase），可以有效防止因 PCR產(chǎn)物污染造成的假陽性結(jié)果。

6.可用于基因表達分析、SNP 分析、拷貝數(shù)分析等實驗。也可以用于定性檢測。

7.本產(chǎn)品反復(fù)凍融 20 次對擴增效果沒有任何影響。

8.本產(chǎn)品足夠 100 次 20 μL 體系的探針法 qPCR 反應(yīng)。

9.2×多重探針法qPCR MasterMix（含 UNG 酶）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

2×Multiplex Probe

qPCR MasterMix（with UNG）1 mL1.5 mL 本色蓋

使用手冊1 份1 份

運輸及保存

低溫運輸，-20℃保存, 不凍融時保存期限為 24 個月。如果需要每天使用，可在 4℃放置三周。

自備試劑

DNA 模板、引物、超純水。

使用方法：

1. 如果有 N 個樣品并且做定量分析，最好設(shè)置 N+7 個反應(yīng)，多出的 7 個中，6 個是做標準曲線的陽性對照，一個是陰性對照（NC）。在 N+7 個 PCR 管中，加入下列成分。如果是做定性分析，則 6 個做標準曲線的樣品縮減成一個陽性對照（PC），用

戶自己需要根據(jù)下表進行適當修改（把 6 個標曲反應(yīng)改成 1 個陽性對照反應(yīng)）。

成分N 個樣品管6 個標準

曲線管NC 管

2×多重探針法各 10 μL各 10 μL10 μL

qPCR MasterMix

自備引物 1（10 μM）各 1 μL各 1 μL1 μL

自備引物 2（10 μM）各 1 μL各 1 μL1 μL

自備模板 DNA

基因組 DNA10-100 ng不加不加

或 cDNA1-10 ng不加不加

自備陽性對照模板（6 個梯度）不加各 1 μL（各

加 1 個梯度）不加

陰性對照模板（一般用水）不加不加1 μL

自備探針（0.5 μM）各 1 μL各 1 μL1 μL

自備 50×自備

ROX I 或 ROX II 染料（見注）各 0.4 μL各 0.4 μL0.4 μL

補超純水到20 μL20 μL20 μL

2.放入熒光 PCR 儀中進行擴增, 下表的擴增參數(shù)僅供參考，一定需要根據(jù)靶分子長度， 引物和探針的 Tm 值、標記染料的種類等進行調(diào)節(jié)。一般選擇三步法 PCR：

如果引物 Tm 值接近 60℃，也可以選擇兩步法 PCR：

3.數(shù)據(jù)處理

如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸， 繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值， 再推算出其濃度。

如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性。一般情況下，陰性對照 Ct 大于

或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴增曲線，Ct 值應(yīng)該小于或等于30。對待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性，如果小于 40，則為陽性。

附：

下列信息僅供參考，具體以 qPCR 儀器的使用手冊為準。

1.不需要 ROX 的機型：Agilent MX3000 和 MX4000、iCycler IQ、LightCycler 480、 Smart Cycler System、Thermal Cycler Dice Real Time System 等型號的熒光 PCR 儀器不需要加 ROX 染料，但加入的話也不會影響整個 qPCR 分析。

2.需要使用 ROX I 的機型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step One、 Step One Plus。

3.需要使用 ROX II 的機型： ABI Prism7500 、7500 Fast 、MJ Opticon、MJ

Chromo4、Corbett RotorGene 3000。

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