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中級(jí)會(huì)員 | 第6年

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雙熒光素技術(shù)

時(shí)間:2022/5/23閱讀:902
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熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)是以熒光素(luciferin)為底物來檢測(cè)熒光素酶活性的一種報(bào)告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的過程中,會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。然后可以通過熒光測(cè)定儀(化學(xué)發(fā)光儀)測(cè)定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發(fā)光體系,可以極其靈敏、高效地檢測(cè)基因的表達(dá)。

雙熒光素酶體系,即有兩種熒光素酶,比較常見的組合是螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶,螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素,而海腎熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素。以其中一個(gè)作為內(nèi)參對(duì)照,即表達(dá)量基本恒定,用于減少試驗(yàn)中不同處理間所固有的變化,包括培養(yǎng)細(xì)胞的數(shù)目及活力的差異,細(xì)胞轉(zhuǎn)染及裂解的效率,而另外一個(gè)熒光素酶則作為報(bào)告基因,用于指示不同處理?xiàng)l件下基因的表達(dá)情況。

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