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細胞凋亡誘導技術

時間:2022/5/19閱讀:3236
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【實驗方法與步驟】

  1)細胞凋亡的誘導:HeLa細胞常規(guī)傳代培養(yǎng)至對數生長期(見細胞傳代培養(yǎng))。實驗組細胞加入順鉑溶液(生理鹽水配置)至終濃度為20μmo1/L,37℃,5% CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng)??瞻讓嶒瀸φ占尤氲润w積的生理鹽水,同樣條件繼續(xù)培養(yǎng)。24h后進行染色及形態(tài)學觀察。

  2)胰酶消化細胞,將培養(yǎng)基上清及消化下來的細胞一同轉入離心管中600~800r/min離心10min。

  3)吸去上清,用1mL PBS重懸細胞沉淀,并轉入1.5mL微量離心管中,600~800r/min離心10min。

  4)吸去上清,用500μL PBS重量細胞沉淀,取178μL轉入0.5mL的微量離心管中,加入PI 20μL(終濃度100μg/mL),Hoechest 33342 2μL(終濃度10μg/mL),混勻,37℃溫箱中避光標記15min。

  5600~800r/min離心10min,棄上清,加50μL PBS重懸細胞。

  6)分別從實驗組及對照組中取10μL細胞懸液滴于載玻片上,蓋上蓋玻片。

  7)熒光顯微鏡20倍物鏡在紫外光激發(fā)下觀察,可觀察到凋亡細胞核形態(tài)發(fā)生明顯的改變,出現染色質凝集及邊緣化。


  【注意事項】

  1)誘導細胞凋亡后收集細胞時,注意要同時收集細胞培養(yǎng)基上清液。

  2)懸浮細胞時動作要輕柔,避免損傷細胞。

  3)在實驗中可同時設計壞死細胞的對照,例如,取正常細胞經低滲后進行染色觀察。


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