內皮細胞培養(yǎng)基配方優(yōu)化：避免生長不良問題

結構特點：

基底膜連續(xù)，細胞間通過緊密連接（如Claudin、Occludin蛋白）形成完整的選擇性屏障。脂溶性小分子可自由擴散，而親水性小分子和水則依賴特定的轉運機制（如水通道蛋白）通過。

細胞間連接緊密，細胞間隙約為12 ?，大部分物質運輸依賴跨細胞轉運機制（如囊泡介導的白蛋白轉運）。

細胞收縮性較弱，細胞骨架肌動蛋白分布相對稀疏，整體形態(tài)穩(wěn)定，通透性極低。

功能：

維持血腦屏障（BBB）、血-視網膜屏障等結構完整，保護中樞神經系統(tǒng)免受毒性物質侵害。

典型分布：

大腦（血腦屏障）、心臟、肺、肌肉、皮膚。

結構特點：

細胞表面存在直徑約200-1000 ?的窗孔，大部分覆蓋由 PV-1蛋白形成的非膜性隔膜。這種結構增加了細胞對流體和溶質的通透性，但同時限制了大分子通過。

基底膜連續(xù)，允許小分子和液體的快速交換。

糖萼層在窗孔型內皮表面較為稀疏，其殘留結構仍可能參與微環(huán)境的調節(jié)和溶質交換的選擇性控制。

功能：

參與物質高效濾過（腎小球）、激素分泌（胰島毛細血管）和營養(yǎng)吸收（胃腸道黏膜）。

主要分布：

腎臟（腎小球）、內分泌腺（如胰島）、胃腸道黏膜。

結構特點：

基底膜不連續(xù)或缺失，細胞間間隙較大，可達0.1-1 μm。這種結構支持大分子（如脂蛋白）和血細胞跨內皮轉運，使其能夠進入實質組織。

細胞間連接較松散，可在局部信號（免疫分子、機械應力）影響下調節(jié)血管孔隙大小，參與動態(tài)過濾功能。

功能：

高通透性結構支持大分子和血細胞交換，并在肝臟等器官中承擔免疫清除與調節(jié)功能。

主要分布：

肝臟、脾臟、骨髓等器官的血竇系統(tǒng)。

緊密連接

由跨膜蛋白（如Occludin、Claudin）與胞質錨定蛋白（如ZO-1）形成選擇性屏障，限制細胞間隙中溶質的被動擴散，在血腦屏障等關鍵部位發(fā)揮核心作用。

縫隙連接

由 Connexin 蛋白構成，允許相鄰細胞間直接傳遞離子、小分子及第二信使，實現(xiàn)細胞功能的快速協(xié)同，如鈣信號和代謝物的同步傳播。

黏附連接

通過鈣黏蛋白（如VE-cadherin）與肌動蛋白骨架結合，維持細胞間機械穩(wěn)定性，并參與白細胞黏附與跨內皮遷移，調控炎癥和免疫應答過程。

物質交換功能

所有類型內皮細胞均參與氧氣、營養(yǎng)物質和代謝廢物交換，依其結構采用跨細胞或旁細胞通道，如連續(xù)型內皮細胞主要跨胞機制（如囊泡介導轉運）實現(xiàn)物質交換。

力學響應性

剪切應力可激活內皮型一氧化氮合酶（eNOS），促進一氧化氮（NO）釋放，以擴張血管，維持血流動力學穩(wěn)態(tài)。

穩(wěn)定的脈動血流能夠抑制炎癥因子表達，防止內皮激活與功能紊亂。

病理可塑性

在氧化應激、炎癥等病理條件下，內皮細胞可發(fā)生功能障礙，表現(xiàn)為通透性增加、黏附分子表達上調等。這些變化參與了動脈粥樣硬化、糖尿病血管病變等多種病理過程。

異質性中的統(tǒng)一性

盡管不同組織器官間內皮細胞結構和功能上存在差異顯著，但它們普遍表達一些共同的標志物（如CD31、VE-cadherin），表現(xiàn)出一定的統(tǒng)一性。

內皮細胞具有極性特征，頂端朝向血腔，基底面通過整合素等受體與基底膜結合，從而維持血管結構的完整性。

臍帶采集與清洗

采集新鮮臍帶，用無菌PBS沖洗去除表面血液。

血管識別與分離

沿臍帶縱軸切開，識別單根臍靜脈（其直徑較大、壁薄，與兩條較厚且呈螺旋排列的動脈區(qū)分）。用鑷子進行鈍性剝離，去除周圍結締組織。

血管清洗與封閉

為防止殘留紅細胞和凝血-塊影響后續(xù)操作，用預冷PBS反復灌洗血管至流出液清澈（通常需5-8次）。隨后，用無菌手術夾封閉血管一端，另一端連接注射器，形成封閉系統(tǒng)以控制酶處理范圍。