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化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標(biāo)物>行業(yè)專(zhuān)用試劑>生物試劑>HG-CA001 CAR/TCR 基因拷貝數(shù)檢測(cè)試劑盒

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HG-CA001 CAR/TCR 基因拷貝數(shù)檢測(cè)試劑盒

參考價(jià) 11800
訂貨量 ≥1
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 公司名稱(chēng) 柏萊源(天津)生物科技有限公司
  • 品牌 譜新生物
  • 型號(hào) HG-CA001
  • 產(chǎn)地
  • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷(xiāo)商
  • 更新時(shí)間 2025/3/28 11:02:15
  • 訪問(wèn)次數(shù) 62

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柏萊源(天津)生物科技有限公司主要從事分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑及耗材的銷(xiāo)售,包括核酸提取、PCR產(chǎn)品、血清、細(xì)胞培養(yǎng)耗材等產(chǎn)品。

我司代理品牌及優(yōu)勢(shì)品牌包含但不限于:sigma、Thermo Fisher、Goldbio、Qiagen、Abcam、ATCC、ECACC、Polysciences、艾本德、天根、Takara、B&D、BIOFLUX、biolegend等。

柏萊源(天津)生物科技有限公司具備良好的客戶(hù)服務(wù)意識(shí)和專(zhuān)業(yè)知識(shí),致力于為科研人員提供系統(tǒng)的售前售后服務(wù)。我們以“秉承科研初心,促進(jìn)產(chǎn)業(yè)新興”為經(jīng)營(yíng)理念,專(zhuān)注于為廣大科研工作者提高技術(shù)成果的轉(zhuǎn)化和研發(fā)水平,不斷提升科研效率。我們有足夠的信心去迎接挑戰(zhàn),我們一定會(huì)用專(zhuān)業(yè)的產(chǎn)品知識(shí)和完善的售后服務(wù)來(lái)證明,未來(lái)是屬于我們的!

 

 

 

 

分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑及耗材的銷(xiāo)售,包括核酸提取、PCR產(chǎn)品、血清、細(xì)胞培養(yǎng)耗材等產(chǎn)品。

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100 Reactions
應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥

    CAR/TCR  基因拷貝數(shù)檢測(cè)試劑盒(多重 qPCR- 熒光探針?lè)ǎ?/strong>說(shuō)明書(shū)

貨號(hào): HG-CA001

CAR/TCR 基因拷貝數(shù)檢測(cè)試劑盒


產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

本試劑盒用于核酸的提取、富集、純化等步驟,其處理后的產(chǎn)物可用于臨床體外檢測(cè)使用。

本試劑盒使用超順磁性微球可以特異性的吸附 DNA,通過(guò)洗滌去除 DNA 以外的蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。洗脫液解離吸附在磁珠上的DNA,分離純化得到高質(zhì)量核酸。

檢測(cè)范圍:3×101 copies/μL~3×106 copies/μL

規(guī)格:

100 Reactions

產(chǎn)品組成:

組分規(guī)格存儲(chǔ)條件


CAR 定量參考品(3×108 copies/μL )50μL×1 管-20℃


CAR Primer&Probe Mix550μL×1 管-20℃


2× qPCR Reaction Buffer1.2mL×1 管-20℃


DNA 稀釋液1.5mL×3 管-20℃


ROX High50μL×1 管-20℃


ROX Low50μL×1 管-20℃




產(chǎn)品儲(chǔ)存條件與有限期:

存儲(chǔ)條件見(jiàn)上表,有效期 18 個(gè)月。

適用機(jī)型(包括但不限于):

    ◆ ABI PRISM 7500
    ◆ FQD-96A(博日)
    ◆ CFX96(Bio-Rad)
    ◆ Roche Light Cycler 480
    配合不同機(jī)型使用時(shí),請(qǐng)注意選擇適配的參比染料 ROX

    儀器ROX參比染料
    Applied Biosystems®5700,7000,7300,7700,7900HT,StepOneTM,and StepOnePlusTTMROX High
    Applied Biosystems®7500,ViiATM 7,QuantStudioTM12K Flex,Agilent Mx3000PTM,Mx3005PTM,and Mx4000TMROX Low
    Rotor-GeneTM,DNA Engine OpticonTM,OpticonTM2,Chromo 4TMReal-Time Detector,Mastercycler®ep realplex,
    Smart Cycler®,Roche LightCycle®480,Roche LightCycler®Nano,Bio-Rad CFX96,and llumina EcoTM
    No ROX

    需要準(zhǔn)備材料:

    ◆ 1.5mL 或 2mL 無(wú)菌低吸附離心管
    ◆ 離心機(jī)
    ◆ 熒光定量 PCR 儀

    ◆ 與 PCR 儀適配的 96 孔 qPCR 板或八聯(lián)排管
    ◆ 震蕩器
    ◆ 1000μL,200μL,10μL 無(wú)菌低吸附帶濾芯槍頭
    ◆ 各規(guī)格移液器(如 1000μL,200μL,10μL,2.5μL 等)

    操作步驟:

    一、 樣品前處理

    詳見(jiàn)血液 / 組織 / 細(xì)胞基因組 DNA 純化提取試劑盒(貨號(hào)為 HG-NA100)操作說(shuō)明書(shū)。

    二、qPCR 操作步驟

    1. 定量參考品及 NTC/NCS 的制備

    1.1 定量參考品:取出 CAR 定量參考品、DNA 稀釋液置于冰上融化;待完i全融化后,輕微振蕩混勻,瞬時(shí)離心;

    1.2 取 7 支干凈的 1.5mL 離心管,分別標(biāo)記為 ST0,ST1,ST2,ST3,ST4,ST5,ST6;

    1.3 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋過(guò)程如下表:

    標(biāo)準(zhǔn)品代號(hào)

    稀釋體積

    濃度(copies/μL)

    STO

    10μL定量參考品+90μL DNA稀釋液

    3×10?

    ST1

    10μL STO+90μL DNA稀釋液

    3×106

    ST2

    10μLST1+90μL DNA稀釋液

    3×10?

    ST3

    10μL ST2+90μL DNA稀釋液

    3×10?

    ST4

    10μL ST3+90μL DNA稀釋液

    3×103

    ST5


    10μL ST4+90μL DNA稀釋液


    3×10
    2

    ST6

    10μL ST5+90μL DNA稀釋液

    3×101

    1.4 NTC 的制備:100uL DNA 稀釋液;

    1.5 NCS 的制備 : 隨樣品取 100μL DNA 稀釋液進(jìn)行樣品預(yù)處理。

    2. q-PCR 反應(yīng)液的制備和加樣














    2.1 根據(jù)所需檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測(cè)樣品數(shù)量(一般做 3 個(gè)復(fù)孔),計(jì)算所需孔數(shù):

        反應(yīng)孔數(shù) =(6 個(gè)濃度梯度的標(biāo)曲 +2 個(gè)陰性對(duì)照 NTC 和 NCS + 待測(cè)樣品)×3

    2.2 根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計(jì)算本次所需的 qPCR Mix 總量:

        qPCR Mix =(反應(yīng)孔數(shù) +2 或 3)× 15μL(2 或 3 為操作損失量)

    2.3 將所需試劑置于冰上融化,輕微振蕩混勻,按下表所示配制 qPCR Mix。

    組分單個(gè)反應(yīng)量 (μL)
    2× qPCR Reaction Buffer10
    CAR Primer&Probe Mix4.6
    ROX*0.4
    總體積15
    備注:請(qǐng)對(duì)應(yīng)機(jī)型選擇適配的 ROX;若機(jī)型適配為 no ROX,請(qǐng)加入等體積的去離子水(要求無(wú)核酸及核酸酶污染)。






    3. 將所需試劑置于冰上融化,輕微振蕩混勻,按下表所示加樣(總體積20μL):

    參考品15μL qPCR Mix +5μL ST1/2/3/4/5/6
    陰性對(duì)照15μL qPCR Mix +5μL NTC/NCS
    待測(cè)樣品15μL qPCR Mix +5μL 待測(cè)樣本

    各反應(yīng)孔加樣示例

    4.實(shí)驗(yàn)需使用qPCR實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用的八聯(lián)管或者96孔板進(jìn)行反應(yīng),需去除反應(yīng)體系中的氣泡,并離心將液體離至管底準(zhǔn)備反應(yīng)。
    5.反應(yīng)孔排版示例


    123456789101112
    AST1ST1ST1





    S1S1S1
    BST2ST2ST2





    S2S2S2
    CST3ST3ST3





    S3S3S3
    DST4ST4ST4








    EST5ST5ST5








    FST6ST6ST6





    ERC -S1ERC -S1ERC -S1
    G



    NTCNTCNTC

    ERC -S2ERC -S2ERC -S2
    H



    NCSNCSNCS

    ERC -S3ERC -S3ERC -S3











    96孔板排版示例

    三、 qPCR反應(yīng)程序和參數(shù)設(shè)置

    (以BIO-RAD公司CFX96 qPCR儀為例。)

    1.創(chuàng)建實(shí)驗(yàn)反應(yīng)程序,設(shè)置兩步法反應(yīng)程序如下表:

    Stagel預(yù)變性Reps:195℃10min
    Stage2循環(huán)反應(yīng)Reps:4095℃15s
    60℃60s




    2.創(chuàng)建實(shí)驗(yàn)反應(yīng)板,點(diǎn)擊 Select Fluorophores 選擇熒光 FAM 和 Cy5;

    在反應(yīng)板圖表中,選擇樣品孔,在Sample Type中下拉選擇Unknow,勾選熒光FAM,Target Name命名為Human-DNA;輸入每個(gè)樣品的重復(fù)次數(shù)及Sample Name;

    在反應(yīng)板圖表中,選擇標(biāo)曲孔,在 SampleType 中下拉選擇 Standard,勾選熒光 FAM,Target Name 命名為 CAR;勾選熒光 Cy5,Target Name 命名為 RFG,輸入每個(gè)稀釋梯度的重復(fù)次數(shù)及 SampleName。并且分別在 ST1, ST2, ST3,ST4,ST5,ST6 的 Concentration 一欄賦值為 3E+06、3E+05、3E+04、3E+03、3E+02、3E+01( 單位為 copies/uL) 。

    3.點(diǎn)擊 Run 界面“Start Run”按鈕進(jìn)行 PCR 測(cè)定。4.點(diǎn)擊Run界面“Start Run”按鈕進(jìn)行PCR測(cè)定。

    四、 qPCR結(jié)果分析

    以BIO-RAD公司CFX96 qPCR儀為例
    1. 點(diǎn)擊資料分析視窗Quantitation,可讀取標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率(Slope)、截距(Intercept)、擴(kuò)增效率(Effect)、R2
    2. 在視窗Quantitation Data 中,SQ Mean 一欄可讀取無(wú)模板對(duì)照NTC、NCS、待測(cè)樣本的檢測(cè)值,單位為copies/μL。
    3. 數(shù)據(jù)可靠性評(píng)估:
    • 三個(gè)平行孔間Ct值差應(yīng)小于1.0,Ct值大于35的孔除外;
    • 陰性對(duì)照NTC和NCS的CT值都應(yīng)大于標(biāo)曲最i低濃度的CT值或根據(jù)實(shí)驗(yàn)室自身驗(yàn)證結(jié)果設(shè)定標(biāo)準(zhǔn);
    • 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)R2≥0.98,擴(kuò)增效率85%~110%之間;
    • ERC回收率在50%~150%之間(加標(biāo)回收率=ERC/(0.9*樣品+0.1*ST3)。

    4. 結(jié)果計(jì)算:CAR 拷貝數(shù) / 細(xì)胞 = 2 x CAR / RFG

    注意事項(xiàng):

    1. 本試劑盒已通過(guò)穩(wěn)定性(凍融等因素)的驗(yàn)證,無(wú)需分裝。
    2. 陰性樣品和陽(yáng)性樣品(參考品和待測(cè)樣品等)的配制環(huán)境需區(qū)分區(qū)域,不可在一個(gè)區(qū)域內(nèi)操作,配制人員需穿戴整齊,戴
    好口罩、手套和穿好潔凈服。
    3. 注意在不同加樣步驟間及時(shí)更換吸頭,避免交叉污染,避免長(zhǎng)時(shí)開(kāi)蓋。
    4. 試劑盒必須在有效期內(nèi)使用。
    5. 試劑盒內(nèi)所有組分建議在低溫環(huán)境融化后使用。
    6. 只有嚴(yán)格遵守說(shuō)明書(shū)的操作方法,全部使用本試劑盒配套的試劑才能保證優(yōu)良檢測(cè)效果。
    7. 盡量在當(dāng)天完成樣本前處理純化后立即進(jìn)行后續(xù)qPCR檢測(cè),以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    8. 最終的試驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、操作者的操作方法及試驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)。
    9. 公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé),不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,
    預(yù)留充足的樣本。
    10. 本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷。

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柏萊源(天津)生物科技有限公司的優(yōu)勢(shì):

現(xiàn)貨供應(yīng):公司庫(kù)存充足,可快速發(fā)貨,減少用戶(hù)等待時(shí)間。

效期保障:嚴(yán)格把控產(chǎn)品質(zhì)量,確保試劑效期新鮮,保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

專(zhuān)業(yè)技術(shù)支持:提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案和技術(shù)指導(dǎo),幫助用戶(hù)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,提高實(shí)驗(yàn)成功率。

定制化服務(wù):根據(jù)用戶(hù)需求,提供個(gè)性化的產(chǎn)品和服務(wù)解決方案。

售后保障:完善的售后服務(wù)體系,及時(shí)解決用戶(hù)在使用過(guò)程中遇到的問(wèn)題。

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