HG-CA001 CAR/TCR 基因拷貝數(shù)檢測(cè)試劑盒
參考價(jià) | ¥ 11800 |
訂貨量 | ≥1件 |
- 公司名稱(chēng) 柏萊源(天津)生物科技有限公司
- 品牌 譜新生物
- 型號(hào) HG-CA001
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷(xiāo)商
- 更新時(shí)間 2025/3/28 11:02:15
- 訪問(wèn)次數(shù) 62
CAR/TCR 基因拷貝數(shù)檢測(cè)試劑盒多重 q多重 qPCR- 熒光探針?lè)?/a>試劑盒代理分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)譜新生物Hillgene
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分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑及耗材的銷(xiāo)售,包括核酸提取、PCR產(chǎn)品、血清、細(xì)胞培養(yǎng)耗材等產(chǎn)品。
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100 Reactions |
---|---|---|---|
應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
CAR/TCR 基因拷貝數(shù)檢測(cè)試劑盒(多重 qPCR- 熒光探針?lè)ǎ?/strong>說(shuō)明書(shū)
貨號(hào): HG-CA001
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
本試劑盒用于核酸的提取、富集、純化等步驟,其處理后的產(chǎn)物可用于臨床體外檢測(cè)使用。
本試劑盒使用超順磁性微球可以特異性的吸附 DNA,通過(guò)洗滌去除 DNA 以外的蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。洗脫液解離吸附在磁珠上的DNA,分離純化得到高質(zhì)量核酸。
檢測(cè)范圍:3×101 copies/μL~3×106 copies/μL
規(guī)格:
100 Reactions
產(chǎn)品組成:
組分 | 規(guī)格 | 存儲(chǔ)條件 | |||
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CAR 定量參考品(3×108 copies/μL ) | 50μL×1 管 | -20℃ | |||
CAR Primer&Probe Mix | 550μL×1 管 | -20℃ | |||
2× qPCR Reaction Buffer | 1.2mL×1 管 | -20℃ | |||
DNA 稀釋液 | 1.5mL×3 管 | -20℃ | |||
ROX High | 50μL×1 管 | -20℃ | |||
ROX Low | 50μL×1 管 | -20℃ |
產(chǎn)品儲(chǔ)存條件與有限期:
存儲(chǔ)條件見(jiàn)上表,有效期 18 個(gè)月。
適用機(jī)型(包括但不限于):
◆ ABI PRISM 7500
◆ FQD-96A(博日)
◆ CFX96(Bio-Rad)
◆ Roche Light Cycler 480
配合不同機(jī)型使用時(shí),請(qǐng)注意選擇適配的參比染料 ROX
儀器 | ROX參比染料 |
Applied Biosystems®5700,7000,7300,7700,7900HT,StepOneTM,and StepOnePlusTTM | ROX High |
Applied Biosystems®7500,ViiATM 7,QuantStudioTM12K Flex,Agilent Mx3000PTM,Mx3005PTM,and Mx4000TM | ROX Low |
Rotor-GeneTM,DNA Engine OpticonTM,OpticonTM2,Chromo 4TMReal-Time Detector,Mastercycler®ep realplex, Smart Cycler®,Roche LightCycle®480,Roche LightCycler®Nano,Bio-Rad CFX96,and llumina EcoTM | No ROX |
需要準(zhǔn)備材料:
◆ 1.5mL 或 2mL 無(wú)菌低吸附離心管
◆ 離心機(jī)
◆ 熒光定量 PCR 儀
◆ 與 PCR 儀適配的 96 孔 qPCR 板或八聯(lián)排管
◆ 震蕩器
◆ 1000μL,200μL,10μL 無(wú)菌低吸附帶濾芯槍頭
◆ 各規(guī)格移液器(如 1000μL,200μL,10μL,2.5μL 等)
操作步驟:
一、 樣品前處理
詳見(jiàn)血液 / 組織 / 細(xì)胞基因組 DNA 純化提取試劑盒(貨號(hào)為 HG-NA100)操作說(shuō)明書(shū)。
二、qPCR 操作步驟
1. 定量參考品及 NTC/NCS 的制備
1.1 定量參考品:取出 CAR 定量參考品、DNA 稀釋液置于冰上融化;待完i全融化后,輕微振蕩混勻,瞬時(shí)離心;
1.2 取 7 支干凈的 1.5mL 離心管,分別標(biāo)記為 ST0,ST1,ST2,ST3,ST4,ST5,ST6;
1.3 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋過(guò)程如下表:
標(biāo)準(zhǔn)品代號(hào) | 稀釋體積 | 濃度(copies/μL) |
STO | 10μL定量參考品+90μL DNA稀釋液 | 3×10? |
ST1 | 10μL STO+90μL DNA稀釋液 | 3×106 |
ST2 | 10μLST1+90μL DNA稀釋液 | 3×10? |
ST3 | 10μL ST2+90μL DNA稀釋液 | 3×10? |
ST4 | 10μL ST3+90μL DNA稀釋液 | 3×103 |
ST5 |
|
|
ST6 | 10μL ST5+90μL DNA稀釋液 | 3×101 |
1.4 NTC 的制備:100uL DNA 稀釋液;
1.5 NCS 的制備 : 隨樣品取 100μL DNA 稀釋液進(jìn)行樣品預(yù)處理。
2. q-PCR 反應(yīng)液的制備和加樣
2.1 根據(jù)所需檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測(cè)樣品數(shù)量(一般做 3 個(gè)復(fù)孔),計(jì)算所需孔數(shù):
反應(yīng)孔數(shù) =(6 個(gè)濃度梯度的標(biāo)曲 +2 個(gè)陰性對(duì)照 NTC 和 NCS + 待測(cè)樣品)×3
2.2 根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計(jì)算本次所需的 qPCR Mix 總量:
qPCR Mix =(反應(yīng)孔數(shù) +2 或 3)× 15μL(2 或 3 為操作損失量)
2.3 將所需試劑置于冰上融化,輕微振蕩混勻,按下表所示配制 qPCR Mix。
組分 | 單個(gè)反應(yīng)量 (μL) |
2× qPCR Reaction Buffer | 10 |
CAR Primer&Probe Mix | 4.6 |
ROX* | 0.4 |
總體積 | 15 |
3. 將所需試劑置于冰上融化,輕微振蕩混勻,按下表所示加樣(總體積20μL):
參考品 | 15μL qPCR Mix +5μL ST1/2/3/4/5/6 |
陰性對(duì)照 | 15μL qPCR Mix +5μL NTC/NCS |
待測(cè)樣品 | 15μL qPCR Mix +5μL 待測(cè)樣本 |
各反應(yīng)孔加樣示例
4.實(shí)驗(yàn)需使用qPCR實(shí)驗(yàn)專(zhuān)用的八聯(lián)管或者96孔板進(jìn)行反應(yīng),需去除反應(yīng)體系中的氣泡,并離心將液體離至管底準(zhǔn)備反應(yīng)。
5.反應(yīng)孔排版示例
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
A | ST1 | ST1 | ST1 | S1 | S1 | S1 | ||||||
B | ST2 | ST2 | ST2 | S2 | S2 | S2 | ||||||
C | ST3 | ST3 | ST3 | S3 | S3 | S3 | ||||||
D | ST4 | ST4 | ST4 | |||||||||
E | ST5 | ST5 | ST5 | |||||||||
F | ST6 | ST6 | ST6 | ERC -S1 | ERC -S1 | ERC -S1 | ||||||
G | NTC | NTC | NTC | ERC -S2 | ERC -S2 | ERC -S2 | ||||||
H | NCS | NCS | NCS | ERC -S3 | ERC -S3 | ERC -S3 |
96孔板排版示例
三、 qPCR反應(yīng)程序和參數(shù)設(shè)置
(以BIO-RAD公司CFX96 qPCR儀為例。)
1.創(chuàng)建實(shí)驗(yàn)反應(yīng)程序,設(shè)置兩步法反應(yīng)程序如下表:
Stagel | 預(yù)變性 | Reps:1 | 95℃ | 10min |
Stage2 | 循環(huán)反應(yīng) | Reps:40 | 95℃ | 15s |
60℃ | 60s |
2.創(chuàng)建實(shí)驗(yàn)反應(yīng)板,點(diǎn)擊 Select Fluorophores 選擇熒光 FAM 和 Cy5;
在反應(yīng)板圖表中,選擇樣品孔,在Sample Type中下拉選擇Unknow,勾選熒光FAM,Target Name命名為Human-DNA;輸入每個(gè)樣品的重復(fù)次數(shù)及Sample Name;
在反應(yīng)板圖表中,選擇標(biāo)曲孔,在 SampleType 中下拉選擇 Standard,勾選熒光 FAM,Target Name 命名為 CAR;勾選熒光 Cy5,Target Name 命名為 RFG,輸入每個(gè)稀釋梯度的重復(fù)次數(shù)及 SampleName。并且分別在 ST1, ST2, ST3,ST4,ST5,ST6 的 Concentration 一欄賦值為 3E+06、3E+05、3E+04、3E+03、3E+02、3E+01( 單位為 copies/uL) 。
3.點(diǎn)擊 Run 界面“Start Run”按鈕進(jìn)行 PCR 測(cè)定。4.點(diǎn)擊Run界面“Start Run”按鈕進(jìn)行PCR測(cè)定。
四、 qPCR結(jié)果分析
以BIO-RAD公司CFX96 qPCR儀為例
1. 點(diǎn)擊資料分析視窗Quantitation,可讀取標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率(Slope)、截距(Intercept)、擴(kuò)增效率(Effect)、R2。
2. 在視窗Quantitation Data 中,SQ Mean 一欄可讀取無(wú)模板對(duì)照NTC、NCS、待測(cè)樣本的檢測(cè)值,單位為copies/μL。
3. 數(shù)據(jù)可靠性評(píng)估:
• 三個(gè)平行孔間Ct值差應(yīng)小于1.0,Ct值大于35的孔除外;
• 陰性對(duì)照NTC和NCS的CT值都應(yīng)大于標(biāo)曲最i低濃度的CT值或根據(jù)實(shí)驗(yàn)室自身驗(yàn)證結(jié)果設(shè)定標(biāo)準(zhǔn);
• 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)R2≥0.98,擴(kuò)增效率85%~110%之間;
• ERC回收率在50%~150%之間(加標(biāo)回收率=ERC/(0.9*樣品+0.1*ST3)。
4. 結(jié)果計(jì)算:CAR 拷貝數(shù) / 細(xì)胞 = 2 x CAR / RFG
注意事項(xiàng):
1. 本試劑盒已通過(guò)穩(wěn)定性(凍融等因素)的驗(yàn)證,無(wú)需分裝。
2. 陰性樣品和陽(yáng)性樣品(參考品和待測(cè)樣品等)的配制環(huán)境需區(qū)分區(qū)域,不可在一個(gè)區(qū)域內(nèi)操作,配制人員需穿戴整齊,戴
好口罩、手套和穿好潔凈服。
3. 注意在不同加樣步驟間及時(shí)更換吸頭,避免交叉污染,避免長(zhǎng)時(shí)開(kāi)蓋。
4. 試劑盒必須在有效期內(nèi)使用。
5. 試劑盒內(nèi)所有組分建議在低溫環(huán)境融化后使用。
6. 只有嚴(yán)格遵守說(shuō)明書(shū)的操作方法,全部使用本試劑盒配套的試劑才能保證優(yōu)良檢測(cè)效果。
7. 盡量在當(dāng)天完成樣本前處理純化后立即進(jìn)行后續(xù)qPCR檢測(cè),以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
8. 最終的試驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、操作者的操作方法及試驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)。
9. 公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé),不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,
預(yù)留充足的樣本。
10. 本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷。
CAR/TCR 基因拷貝數(shù)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品訂購(gòu),請(qǐng)聯(lián)系柏萊源(天津)生物科技有限公司!
柏萊源(天津)生物科技有限公司的優(yōu)勢(shì):
現(xiàn)貨供應(yīng):公司庫(kù)存充足,可快速發(fā)貨,減少用戶(hù)等待時(shí)間。
效期保障:嚴(yán)格把控產(chǎn)品質(zhì)量,確保試劑效期新鮮,保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
專(zhuān)業(yè)技術(shù)支持:提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案和技術(shù)指導(dǎo),幫助用戶(hù)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,提高實(shí)驗(yàn)成功率。
定制化服務(wù):根據(jù)用戶(hù)需求,提供個(gè)性化的產(chǎn)品和服務(wù)解決方案。
售后保障:完善的售后服務(wù)體系,及時(shí)解決用戶(hù)在使用過(guò)程中遇到的問(wèn)題。
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