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原代細(xì)胞復(fù)蘇技術(shù)2017/7/6
1.原代細(xì)胞凍存復(fù)蘇技術(shù)簡介在ELISPOT檢測的應(yīng)用中,往往需要用到凍存的淋巴細(xì)胞樣品作為檢測細(xì)胞。由于ELISPOT檢測的是細(xì)胞的免疫功能,不僅僅需要保持細(xì)胞的存活率,而且還要保證細(xì)胞的功能不發(fā)生...
細(xì)胞常見的保存方法2017/7/4
原代細(xì)胞保存溫度越低,保存時限更長;溫度越低,對細(xì)胞傷害越大;低溫也不怕,我有防凍劑(e.g.甘油)。下面的表格就是五種常見保存細(xì)菌細(xì)胞的方法和大約時限。保存條件溫度°C大約時間瓊脂平板44-6周(A...
細(xì)胞同步化實驗操作步驟2017/6/29
在腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)過程中,細(xì)胞多處于不同的細(xì)胞周期時相中。不同時相的細(xì)胞對藥物干預(yù)存在不同的反應(yīng),會影響實驗的重復(fù)性,因此需要制備細(xì)胞周期一致的細(xì)胞。細(xì)胞同步化是解決該問題的好辦法。細(xì)胞同步化是利用藥物或...
細(xì)胞懸液標(biāo)本制備實驗步驟2017/6/27
細(xì)胞系懸液標(biāo)本制備實驗步驟(1)取材:收集對數(shù)生長期細(xì)胞于離心管中,800~1000r/min離心10min,棄上清,彈指法混勻細(xì)胞。沿管壁加入2.0%~2.5%冷戊二醛,輕輕吹打,4℃固定30min...
原代細(xì)胞培養(yǎng)注意事項2017/6/22
原代細(xì)胞培養(yǎng):1、實驗材料要新鮮,從活體分離材料后要低溫保存,并盡快進行細(xì)胞分離實驗。2、無菌操作。操作時用的培養(yǎng)液,可加平時細(xì)胞培養(yǎng)液5倍含量的青鏈霉素。3、用酶法分離細(xì)胞時,注意酶液的濃度和控制消...
腫瘤細(xì)胞凍存保護劑2017/6/20
腫瘤細(xì)胞很多化合物都可以作為凍存保護劑,它們既可以單獨使用也可以聯(lián)合使用,例如糖、血清和去污劑。雖然凍存沒有的準(zhǔn)則,但是大家普遍認(rèn)為二甲基亞砜(DMSO)和甘油是保護活細(xì)胞和組織使用zui廣泛且zui...
人類外周血淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)方法2017/6/15
實驗原理染色體是在顯微鏡下可見細(xì)胞系有絲分裂過程中出現(xiàn)的結(jié)構(gòu)。因此,必須獲得染色體標(biāo)本才能進行檢查分析,通常情況下,都是利用外周血淋巴細(xì)胞進行核型分析。正常情況下,人體外周血淋巴細(xì)胞不再分裂,但植物血...
細(xì)胞長期保存的方法2017/6/13
細(xì)胞系長期低溫冰凍必然會導(dǎo)致部分細(xì)胞死亡,而且很多時候我們要把細(xì)胞樣本拿來重新接種做實驗,所以解凍再凍的過程也會導(dǎo)致細(xì)胞死亡。那么起始樣本的細(xì)胞濃度就要達到一定的高度,這樣在以后保存的過程中就算死亡一...
原代細(xì)胞培養(yǎng)過程可能出現(xiàn)的問題及解決辦法2017/6/8
原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題,客戶遇到的問題從細(xì)胞生長角度來說,針對細(xì)胞不貼壁、生長緩慢、生長不好,甚至死亡的原因,我們做以下分析并提出相對應(yīng)的解決方法。一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁可能原因:●胰蛋...
細(xì)胞株培養(yǎng)時消毒滅菌的方法2017/6/6
細(xì)胞株嚴(yán)格的消毒滅菌對保證細(xì)胞培養(yǎng)的成功是極為重要的,其方法分為物理法和化學(xué)法兩類。前者包括干熱、濕熱、濾過、紫外線及射線等,后者主要指使用化學(xué)消毒劑等。①熱滅菌:玻璃器皿,160~170℃,90~1...
ATCC細(xì)胞株解凍和培養(yǎng)操作推薦2017/6/1
凍存的ATCC細(xì)胞株和雜交腐細(xì)胞株在運送過程中使用干冰保持低溫。收到細(xì)胞后,可以立即解凍復(fù)蘇,去除二甲基亞砜(DSMO0)后進行細(xì)胞培養(yǎng)。如果不立即復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞,必須將細(xì)胞凍存管放置于液氮罐氣相層儲存...
原代細(xì)胞保存的主要方法之一細(xì)胞凍存2017/5/25
利用凍存技術(shù)將原代細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其...
原代細(xì)胞培養(yǎng)基的保存方法分析2017/5/23
原代細(xì)胞培養(yǎng)基的保存方法分析1.干粉,買了后一定要保存在4度。有人保存在-20度我認(rèn)為沒有必要。但4度是非常必要的。保證期是有提示的。2.配好的無血清培養(yǎng)基一定保存在4度,保存不要超過3個月。用時根據(jù)...
原代細(xì)胞如何消除組織培養(yǎng)的污染2017/5/18
原代細(xì)胞當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時,研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母,把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺,檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生...
哪些方法可以使細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基2017/5/16
1.細(xì)胞株直接適應(yīng)法式—將細(xì)胞直接從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基中。2.連續(xù)適應(yīng)或循序隔絕法—分幾步將細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基中。與直接適應(yīng)法相比較,連續(xù)適應(yīng)法對于細(xì)胞更溫和些。...

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