Cas14a檢測系統(tǒng)用DNA熒光-淬滅標記熒光探針 返回列表頁

Cas14a檢測系統(tǒng)用DNA熒光-淬滅標記熒光探針上?；菡\生物現(xiàn)貨供應

Cas14a核酸酶是一種內(nèi)切核酸酶，其在tracrRNA:crRNA（或sgRNA）的引導下，特異結(jié)合并切割靶標ssDNA，且無需PAM位點。相比于其他的Cas蛋白，Cas14蛋白的分子量普遍較小（400-700aa）；與Cas12類似，Cas14a也可以結(jié)合靶標核酸并激活其ssDNA反式切割活性，從而被應用于靶標核酸的分子檢測；與Cas12不同的是，Cas14a只能結(jié)合ssDNA靶標，因此經(jīng)過擴增富集的靶標核酸需使用T7核酸外切酶進行處理，且其中一條擴增引物需要使用磷硫?；揎椧源_保T7核酸外切酶僅切割其中一條鏈，從而留下ssDNA靶標鏈以用于Cas14a介導的分子檢測。

Cas14a酶的附加DNA酶切功能，可以切割特定單鏈DNA探針（熒光和淬滅標記），使用5'端帶有熒光物質(zhì)（如：FAM等)，3'端帶有淬滅物質(zhì)（如:BHQ1等）的雙標記熒光探針進行熒光檢測的方法。當探針完整時，5'端的熒光物質(zhì)受到3'端的淬滅物質(zhì)的制約，不能發(fā)出熒光。而當雙標記熒光探針被分解后，5'端的熒光物質(zhì)便會游離出來，發(fā)出熒光，實現(xiàn)核酸檢測。RPA擴增的雙鏈DNA，在crRNA的引導下Cas12a可以切割雙鏈模板DNA和熒光標記探針，探針被水解后釋放出熒光信號，通過檢測熒光信號便可知道是否有DNA模板。

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