Cas12a檢測系統(tǒng)用DNA Biotin和FAM標(biāo)記探針 返回列表頁

Cas12a檢測系統(tǒng)用DNA Biotin和FAM標(biāo)記探針上海惠誠生物現(xiàn)貨供應(yīng)

上?；菡\生物提供Cas12a檢測系統(tǒng)用雙標(biāo)記探針（DNA Biotin和FAM雙標(biāo)記）。

CRISPR_Cas核酸酶主要包括兩類：一類是RNA引導(dǎo)下可以切割RNA鏈的Cas13a和Cas13b；另一類是RNA引導(dǎo)下可以切割DNA鏈的Cas12a和Cas14。Cas12a和Cas13都有一個共同特點(diǎn)，除了切割靶向DNA或RNA序列之外，還可以切割其他DNA或RNA序列，但是Cas13酶的這種附加切割能力比Cas12a要強(qiáng)。Cas12a的靶基因是ssDNA和dsDNA，并且Cas12a引導(dǎo)鏈需要識別PAM序列（Cas12a的PAM序列為TTTV）。

Cas12a 核酸酶（其他名稱 Cpf1）是依賴于 RNA 介導(dǎo)的內(nèi)切核酸酶，在靶標(biāo) DNA 存在 PAM 的情況下， 可特異地切割靶標(biāo)雙鏈 DNA。與 Cas9 不同：（1）Cas12a 只需要單個 crRNA，且體積更小、更易 被遞送至細(xì)胞中；（2）Cas12a 切割后產(chǎn)生粘性末端，更利于基因組精確編輯；（3）Cas12a 的切 割位點(diǎn)遠(yuǎn)離其識別位點(diǎn)，為連續(xù)多次編輯提供了可能性；（4）Cas12a 識別的 PAM 序列與 Cas9 不 同，因此提供了不同編輯位點(diǎn)的選擇；針對不同的 Cas12a 蛋白，其識別靶標(biāo)所需的 PAM 位點(diǎn)不 同，其中部分 Cas12a 蛋白識別 TTN 位點(diǎn)，部分 Cas12a 蛋白識別 TTTN 位點(diǎn)。

DNA探針的標(biāo)記方法較成熟，有多種方法可供選擇，如缺口平移法、隨機(jī)引物法、PCR標(biāo)記法等，能用于同位素和非同位素標(biāo)記。

DNA探針技術(shù)又稱分子雜交技術(shù)，是利用DNA分子的變性、復(fù)性以及堿基互補(bǔ)配對的高度精確性，對某一特異性DNA序列進(jìn)行探查的新技術(shù)。DNA探針是利用同位素、生物(空格)素等標(biāo)記的特定DNA片斷，該片斷可大至寄生蟲基因組DNA，小至20個堿基。當(dāng)DNA探針與待測的非標(biāo)記單鏈DNA（或RNA）按堿基順序互補(bǔ)結(jié)合時，以氫健將2條單鏈連接而形成標(biāo)記DNA-DNA（或標(biāo)記DNA-RNA）的雙鏈雜交分子。將未配對結(jié)合的核苷酸溶解后用檢測系統(tǒng)（放射自顯影或酶檢測等）檢測雜交反應(yīng)結(jié)果。由于DNA分子堿基互補(bǔ)的精確性，單連DNA探針僅與樣品中變性處理的DNA單鏈出現(xiàn)配對雜交，由此決定了探針的特異性；用放射性同位素（如32P）或生物(空格)素標(biāo)記探針，使雜交試驗(yàn)同時具有高度的敏感性。

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