EHA105(pSoup)農(nóng)桿 返回列表頁

EHA105(pSoup)農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞

產(chǎn)品信息：
組成 BC313-01
EHA105(pSoup) Chemically Competent Cell 20×100μl
pGs2 (100ng/μl) 1 支
儲存條件：-70℃保存，避免反復凍融。不適合在液氮中保存。
基因型：C58 (rifR ) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)（strep R）Succinamopine pSoup（tetR）
產(chǎn)品介紹：
農(nóng)桿菌EHA105(pSoup)菌株由EHA105菌株改造而來，為C58型背景，核基因中含有抗性篩選基因rif。此菌株攜帶一無自
身轉(zhuǎn)運功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)，此質(zhì)粒含有vir 基因（vir 基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，
pEHA105(pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移）。一些缺失農(nóng)桿菌
復制相關元件（如pVS1的復制起點REP區(qū)或pVS1質(zhì)粒的STA區(qū)）的表達質(zhì)粒如pGreen、pGreenII-62SK和pGs2等不能在EHA105菌株中繁殖。pSoup輔助質(zhì)?？梢詭椭@些不完整雙元表達質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中的復制。EHA105(pSoup)菌株具有四環(huán)素（Tet）抗性。
EHA105(pSoup)適用于水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作。經(jīng)植物表達質(zhì)粒pGs2檢測，轉(zhuǎn)化效率可達10 3 cfu/μg，-70℃保存12 個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。
轉(zhuǎn)化方法：（采用凍融方法）
1. 取-70℃保存的EHA105(pSoup)農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞于冰水浴中融化；
2. 無菌條件下，向感受態(tài)細胞中加入100ng-1μg質(zhì)粒DNA（次使用，做一下預實驗，確定所加質(zhì)粒的量），輕輕
混勻，冰水浴中靜置5 分鐘；
3. 將離心管置于液氮中速凍5分鐘；（注：可用干冰和無水乙醇混合物代替液氮）
4. 然后快速將離心管置于37℃水浴中保持5分鐘，不要晃動水面；
5. 將離心管放回冰水浴中，冰浴5分鐘；
6. 無菌條件下加入800μl無抗生素的2xYT、SOB、SOC或LB液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2-3小時，菌體復蘇；
7. 6000rpm離心1分鐘收菌，留100μl左右上清，輕輕吹打重懸菌體，取適量菌液，涂布于相應抗生素的LB平板上，于28℃培養(yǎng)
箱中倒置培養(yǎng)48-72小時。（實驗表明當平板只含有50μg/ml的Kan時，28℃培養(yǎng)48 h即可看到菌落；平板中含有50 μg/ml Kan
和20 μg/ml Rif 時，需28℃培養(yǎng)60 h可看到菌落； 如果平板中含有50 μg/ml Kan和50 μg/ml Rif時則需要28℃培養(yǎng)72-90 h可看
到菌落）。
注意事項：
1. 加入質(zhì)粒時體積不應大于感受態(tài)體積的1/10；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉(zhuǎn)化效率急劇下降；質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化
效率下降一個數(shù)量級。
2. 混入質(zhì)粒時應輕柔操作。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。
3. 平板上陽性克隆密度過大時，由于營養(yǎng)不足，陽性克隆生長變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應減少質(zhì)粒用量。
4. 濃度不應高于25 μg/ml，過高的濃度不利于農(nóng)桿菌生長，會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率。
5. 培養(yǎng)基中加入的目的是防止雜菌生長和篩選農(nóng)桿菌；根據(jù)所用菌株抗性加入Ti 質(zhì)粒篩選抗生素可防止Ti 質(zhì)粒丟失，
但Ti 質(zhì)粒篩選抗生素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作，所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時不考慮這些抗生素，Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低(可以
忽略)。
6. 相關抗生素配制及工作濃度
（Rif）用DMSO配制成20mg/ml的儲存液，工作濃度為20μg/ml。（Tet）用甲醇溶解成10mg/ml的儲存液，
工作濃度為10μg/ml。硫酸（Kan）、（Strep）、硫酸（Gent）和羧芐鈉鹽（Carb）分別
用雙蒸水配制成濃度為50mg/ml，50mg/ml、40mg/ml和50mg/ml的儲存液，并用0.22μg濾器過濾除菌。工作濃度分別為
Kan:50μg/ml，Strep:50μg/ml，Gent:40μg/ml和Carb:50μg/ml。


南京萬木春生物科技有限公司（Najing Wanmuchun Biotechnology Co., Ltd)面向國內(nèi)外市場專業(yè)研發(fā)、生產(chǎn)和銷售細胞、 外泌體、ELISA 試劑盒、 抗體、重組蛋白及相關試劑。產(chǎn)品在免疫學、信號轉(zhuǎn)導、代謝、 神經(jīng)科學等領域內(nèi)都有科學文獻發(fā)表，被國內(nèi)外多所大學、研究機構(gòu)和藥學平臺使用并發(fā)表文獻多達1000多次。我公司憑借優(yōu)異的產(chǎn)品和完善的服務 體系現(xiàn)已受到廣大國內(nèi)外用戶的青睞和認可。
品牌優(yōu)勢
1、產(chǎn)品優(yōu)勢：產(chǎn)品具有高特異性、回收率高、線性好、變異系數(shù)低、穩(wěn)定性好；
2、質(zhì)量保證：產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，每批次產(chǎn)品必須通過 QA、QC 檢測才可出庫；
3、實力強大： 標準實驗室、研發(fā)中心，動物房 ；
4、技術支持：技術部 5*8 小時技術問題及時解答；
5、服務周到：發(fā)貨及時，三個工作日順豐快遞；售后無憂，包退包換。
6、研發(fā)、生產(chǎn)科研產(chǎn)品：ELISA 試劑盒：人、大小鼠、牛、兔、山羊、倉鼠、豬、馬、雞、犬、豚鼠、猴、綿羊等多種屬1000多種指標；
抗體：兔多抗、鼠單抗種類豐富，一抗 1 萬余種，二抗 100 多種；
重組蛋白：多項發(fā)明，原核表達系統(tǒng)穩(wěn)定表達蛋白 1000 余種。


掃一掃，加微信
聯(lián)系電話：19156044901 （同微信） ，QQ： 3361589519