BJ5183 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受 返回列表頁

BJ5183 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品信息：
組成 BC402-01
BJ5183 Electrocompetent cells 20×50μl
pUC19（0.1ng/μl） 5μl
儲存條件：-70℃保存，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品說明：
BJ5183電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞只能用于電擊轉(zhuǎn)化，不能用于熱激轉(zhuǎn)化。BJ5183為重組腺病毒質(zhì)粒構(gòu)建專用菌株，
能夠表達(dá)供pAdEasy骨架質(zhì)粒和pAdEasy穿梭質(zhì)粒進(jìn)行同源重組的所有組分。pUC19質(zhì)粒檢測感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)
化效率大于10 9 cfu/μg。
基因型：endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR )
菌株抗性：對氨芐，敏感，有抗性。
操作方法：
1. 電極間距為 0.1cm 的電轉(zhuǎn)杯（Gene Pulser®/MicroPulser™ electroporation cuvettes）插入碎冰中，壓實冰
面，冰中靜置 5 分鐘，使電轉(zhuǎn)杯充分降溫。（電轉(zhuǎn)杯重復(fù)使用方法：每次用完后，用大量的自來水沖
洗干凈去掉菌液和 DNA，用蒸餾水洗 3 遍，將其泡在 75%乙醇中 30 分鐘，取出杯子，瀝干液體，放
在超凈臺中，使乙醇充分揮發(fā)，蓋上蓋子放干燥地方備用。）
2. 取-70℃保存的感受態(tài)細(xì)胞插入冰中，待細(xì)胞剛化凍后，加入質(zhì)粒 DNA 或連接產(chǎn)物（洗脫或溶解質(zhì)粒
的溶液中離子不能太高，或用雙蒸水稀釋，對照 pUC19 可以用無菌水稀釋到 10pg/μl），用手指管
底輕輕混勻，立即插入冰中，在超凈臺中用無菌吸頭將細(xì)胞/DNA 混合物快速轉(zhuǎn)移到電擊杯中，避免產(chǎn)
生氣泡，確保細(xì)胞沉到杯底，蓋上杯蓋，空管保留待用。
3. 啟動電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置電擊參數(shù)：2.4 kV，200Ω，25 μF（BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser）。用紙巾擦
掉電轉(zhuǎn)杯外部的水分，將電轉(zhuǎn)杯放入電轉(zhuǎn)槽中進(jìn)行電擊。完成后，將電轉(zhuǎn)杯插入冰中，加入950μl無抗
生素的SOC或LB培養(yǎng)基，并將液體轉(zhuǎn)移到原來保留的感受態(tài)空管中，37℃，150-250rpm振蕩培養(yǎng)1小時。
4. 取 100-200μl 左右的菌液或稀釋后的菌液，涂布于含相應(yīng)抗生素的 LB 平板上，倒置放于 37℃培養(yǎng)箱培
養(yǎng) 12-18 小時。
注意事項：
1. 電轉(zhuǎn)杯必須預(yù)冷。
2. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)該在冰水浴中化凍，加入 DNA 后應(yīng)輕柔混勻，加入 DNA 的體積小于細(xì)胞體積的 1/10。
3. 一旦 DNA 加入到細(xì)胞中，電擊操作應(yīng)該立即進(jìn)行。
4. DNA 應(yīng)該溶解在水或 TE 中，連接酶的存在會降低轉(zhuǎn)化效率，必要時需純化連接產(chǎn)物。
5. 電擊時，電轉(zhuǎn)杯中的氣泡、含高濃度鹽離子的 DNA 或轉(zhuǎn)化產(chǎn)物會導(dǎo)致電弧現(xiàn)象的發(fā)生。
6. 電擊完成后應(yīng)該立刻加上 LB 或 SOC 等復(fù)蘇培養(yǎng)基，每分鐘延遲加入會導(dǎo)致 3 倍轉(zhuǎn)化效率的降低。
He, T. C., Zhou, S., da Costa, L. T., Yu, J., Kinzler, K. W. et al. (1998) Proc Natl Acad Sci U S A 95(5):2509-14.


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