Stable 大腸桿菌克隆感受 返回列表頁

Stable 大腸桿菌克隆 感受態(tài)細胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC118-01
Stable Competent cells 20×100?l
pUC19（0.1ng/µl） 5?l
儲存條件：-70℃保存，避免反復凍融。不適合在液氮中保存。
產(chǎn)品介紹：
本公司生產(chǎn)的Stable感受態(tài)細胞是采用Stable菌株經(jīng)特殊工藝制備得到的感受態(tài)細胞。Stable菌株特別適用
于具有末端重復序列的逆轉錄病毒或慢病毒質粒的構建和擴增，也適用于重復DNA序列的克隆和擴增。Stable
具有與Stbl3和Stbl4不同的基因型，比Stbl3和Stbl4生長速度更快，性能更好。核酸內切酶(endA1)基因的缺
失有利于提高質粒DNA的產(chǎn)量和質量。ΔlacZM15基因的存在可用于藍白斑篩選。菌株還具有抗T1噬菌體感染
的特點。Stable感受態(tài)細胞經(jīng)pUC19質粒檢測轉化效率大于10 8 cfu/μg。
基因型:
F′ proA+B+ lacI q Δ(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR )/Δ(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ΔlacX74 galK16 galE15e14-
?80dlacZΔM15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR ) rph spoT1 Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)
菌株抗性：對氨芐、、、和敏感。具有四環(huán)素和抗性。
質粒轉化步驟
1.將感受態(tài)細胞置于冰水浴中化凍。待細胞剛化凍后，加入 1-5μl 含有 1-100ng 的質粒 DNA 或 5-10μl 連接
產(chǎn)物到細胞中，用手指管底，輕輕混勻。
2.冰水浴中放置 30 分鐘，不要晃動。
3.42℃熱擊 60 秒鐘，不要晃動。
4.冰水浴中放置 2 分鐘，不要晃動。
5.加入 500μl 的室溫的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基。
6.置于 37℃搖床中，150-200rpm 震蕩復蘇培養(yǎng) 60 分鐘。
7.取 50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板，37℃培養(yǎng) 12-18 小時。
（平板劃線分離法：復蘇培養(yǎng)結束后，12000rpm離心30秒鐘，棄掉上清，留100μl左右的液體，用200μl吸頭輕
輕吹打散菌塊，取10μl重懸的菌液分多點滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側面將滴在平板上的液體來
回劃線。這個方法可以獲得更大的單克隆菌落。此方法主要適用于質粒轉化，連接產(chǎn)物轉化用涂布法。）
（質?？焖俎D化步驟：對于氨芐抗性的質粒，將步驟 2 的時間縮短到 5 分鐘，步驟 4 完成后，可直接涂
布或劃線于含氨芐抗性的 LB 平板上。其它抗性的質粒仍需 60 分鐘的復蘇培養(yǎng)。）


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重組蛋白：多項發(fā)明，原核表達系統(tǒng)穩(wěn)定表達蛋白 1000 余種。


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