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ArcticExpress(DE3)大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC218-01
ArcticExpress(DE3) 20×100?l
pUC19 質(zhì)粒 5?l
儲存條件：-70℃保存，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品說明：
ArcticExpress(DE3)細(xì)胞來源于 BL21-Gold 菌株，屬于 Lon 和 OmpT 蛋白酶缺陷型的大腸桿菌 B 菌株。菌株含有抗性
的質(zhì)粒能穩(wěn)定表達(dá)海洋細(xì)菌 Oleispira antarctica 的兩個低溫分子伴侶 Cpn10 和 Cpn60。這些伴侶蛋白在較低溫度（4-12℃）下，比
大腸桿菌 GroEL/GroES 表現(xiàn)出更高的活性, 在低溫下可以更好地促進(jìn)重組蛋白的正確折疊，潛在地增加了可溶性重組蛋白的產(chǎn)率和
活性，克服重組蛋白的錯誤折疊和不溶性。該菌株又具備λ噬菌體 DE3 基因區(qū)，可以表達(dá) T7 RNA 聚合酶，適用于含有 T7 啟動子
的原核表達(dá)載體（如 pET 等）的高效表達(dá)。非 T7 啟動子的表達(dá)載體（如 pGEX、pMal，pTrc 等載體）也可以在該菌株中表達(dá)。
ArcticExpress(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制成，pUC19 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率大于 1×107 cfu/μg DNA。
基因型: F – ompT hsdS(rB– mB –) dcm+ Tetr gal λ(DE3) endA Hte (cpn10 cpn60 Gentr )
菌株抗性：具有、四環(huán)素抗性。對氨芐、、、、敏感。
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化步驟：
1.將感受態(tài)細(xì)胞置于冰水浴中化凍。待細(xì)胞剛化凍后，加入質(zhì)粒 DNA 或 5-10μl 連接產(chǎn)物到細(xì)胞中，用手指管底，輕輕混勻；
2.冰水浴中放置 30 分鐘，不要晃動；
3.42℃熱擊 60 秒鐘，不要晃動；
4.冰水浴中放置 2 分鐘，不要晃動；
5.加入 500μl 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基；
6.置于 37℃搖床中，150-200rpm 震蕩復(fù)蘇培養(yǎng) 60 分鐘；
7.取 50-100μl 菌液涂布在含有 20ug/ml 的和適當(dāng)濃度的轉(zhuǎn)化質(zhì)粒的抗性抗生素的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板，
37℃培養(yǎng) 12-16 小時。
（平板劃線分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后，12000rpm 離心 30 秒鐘，棄掉上清，留 100μl 左右的液體，用 200μl 吸頭輕輕吹打散菌塊，
取 10μl 重懸的菌液分多點(diǎn)滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的液體來回劃線。這個方法可以獲得更多更大
的單克隆菌落。）
蛋白表達(dá)步驟：
1.挑取單菌落，接種到含 5ml 帶抗生素的 LB 培養(yǎng)基中；
2.37℃，200rpm 震蕩培養(yǎng)細(xì)菌至對數(shù)生長期（OD600=0.4-0.8）；
3.加入 IPTG 到終濃度為 0.4mM，37℃誘導(dǎo) 2-4 小時或 16℃誘導(dǎo)過夜；
（低溫誘導(dǎo)方法：37℃，200rpm 震蕩培養(yǎng)細(xì)菌到 1-2 個 OD 左右，然后將培養(yǎng)物降溫至 10–13°C，低溫培養(yǎng) 15 分鐘達(dá)到平衡，將
IPTG 添加到搖瓶中，最終濃度達(dá)到為 0.1-0.5mM 之間。繼續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng) 12-24 小時。）
4.誘導(dǎo)完成后，離心收集菌體，用合適的方法（如考馬斯亮藍(lán)染膠法，Western-Blot 法或酶活性分析法）分析菌體裂解物的總蛋白、
上清和沉淀組分，明確表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)狀況（可溶性或不溶性表達(dá)）；
5.大量表達(dá)時，可用 10ml 過夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到 1L 培養(yǎng)基中，當(dāng)培養(yǎng)到 OD600=0.4-0.8 時，加入終濃度為 0.4mM 的 IPTG，37℃誘導(dǎo)2-4 小時或 16℃誘導(dǎo)過夜（不同蛋白表達(dá)的條件有所不同，需在實(shí)驗中優(yōu)化


南京萬木春生物科技有限公司（Najing Wanmuchun Biotechnology Co., Ltd)面向國內(nèi)外市場專業(yè)研發(fā)、生產(chǎn)和銷售細(xì)胞、 外泌體、ELISA 試劑盒、 抗體、重組蛋白及相關(guān)試劑。產(chǎn)品在免疫學(xué)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、代謝、 神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域內(nèi)都有科學(xué)文獻(xiàn)發(fā)表，被國內(nèi)外多所大學(xué)、研究機(jī)構(gòu)和藥學(xué)平臺使用并發(fā)表文獻(xiàn)多達(dá)1000多次。我公司憑借優(yōu)異的產(chǎn)品和完善的服務(wù) 體系現(xiàn)已受到廣大國內(nèi)外用戶的青睞和認(rèn)可。
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抗體：兔多抗、鼠單抗種類豐富，一抗 1 萬余種，二抗 100 多種；
重組蛋白：多項發(fā)明，原核表達(dá)系統(tǒng)穩(wěn)定表達(dá)蛋白 1000 余種。


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