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Tuner(DE3)大腸桿菌感受態(tài)細胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC211-01 BC211-02
Tuner(DE3) 10×100?l 20×100?l
pUC19 質(zhì)粒 5?l 5?l
儲存條件：-70℃保存，避免反復凍融。不適合在液氮中保存。
產(chǎn)品介紹：
Tuner(DE3)為 LacYZ 突變型 BL21(DE3)菌株。Tuner(DE3)菌株可利用 IPTG 的加入量來精準地控制重組蛋白的表達量，與 pET
系列載體聯(lián)合使用，可以使得蛋白表達從低表達水平到高表達水平進行有效調(diào)控（使用低濃度的 IPTG 誘導重組蛋白低水平表達時，
目的蛋白可能會具有更好的可溶性和生物活性）。該菌株含有λ噬菌體 DE3 區(qū)，可以表達 T7 RNA 聚合酶。Tuner(DE3)菌株屬于 B
菌株，lon 和 ompT 蛋白酶缺陷型。Tuner(DE3)感受態(tài)細胞由特殊工藝制成，pUC19 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達 10 7cfu/μg DNA。
基因型：F -ompT hsdSB (rB -mB -) gal dcmlacY1 (DE3)
菌株抗性：對氨芐，，和四環(huán)素敏感。
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化步驟：（以氨芐抗性的 pET 質(zhì)粒為例）
1. 將感受態(tài)細胞置于冰水浴中化凍。待細胞剛化凍后，加入 1-5μl 含有 1-100ng 的質(zhì)粒 DNA 到細胞中，用手指管底，輕
輕混勻。
2. 冰水浴中放置 30 分鐘，不要晃動。
3. 42℃熱擊 60 秒鐘，不要晃動。
4. 冰水浴中放置 2 分鐘，不要晃動。
5. 加入 500μl 的室溫的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基。
6. 置于 37℃搖床中，150-200rpm，復蘇培養(yǎng) 60 分鐘。
7. 取 50-100μl 菌液涂布在含有氨芐抗性的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板 37℃培養(yǎng) 12-24 小時。
（平板劃線分離法：復蘇培養(yǎng)結(jié)束后，12000rpm 離心 30 秒鐘，棄掉上清，留 100μl 左右的液體，用 200μl 吸頭輕輕吹打散菌塊，
取 10μl 重懸的菌液分多點滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的液體來回劃線。這個方法可以獲得更大的
單克隆菌落）。
蛋白表達步驟：
1. 挑取單菌落，接種到含 5ml 帶抗生素的 LB 培養(yǎng)基中。
2. 37℃，200rpm 震蕩培養(yǎng)細菌至對數(shù)生長期（OD600=0.4-0.8）。
3. 加入 IPTG 到終濃度為 0.4mM，37℃誘導 4 小時或 16℃誘導過夜。（可以設定不同濃度的 IPTG 來誘導表達）
4. 誘導完成后，離心收集菌體，用合適的方法（如考馬斯亮藍染膠法，Western-Blot法或酶活性分析法）分析菌體裂解物的總
蛋白、上清和沉淀組分，明確表達產(chǎn)物的表達狀況（可溶性或不溶性表達）。
5. 重組蛋白大量表達時，可用 10ml 過夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到 1L 培養(yǎng)基中，當培養(yǎng)到 OD600=0.4-0.8 時，加入終濃度為 0.4mM 的 IPTG，
37℃誘導 4 小時或 16℃誘導過夜（不同蛋白表達的條件有所不同，需在實驗中優(yōu)化）。