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諾博萊德 Script III RT Kit With gDNA Eraser反轉(zhuǎn)錄

Script III RT Kit With gDNA Eraser（Perfect for qPCR）

目錄號:71514

產(chǎn)品內(nèi)容

保存條件

-20℃保存，有效期 12 個月。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介

Script III RT Kit With gDNA Eraser是一種高效、穩(wěn)定、快速并可以去除基因組DNA污染的反轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)。本產(chǎn)品具有強大的基因組清除能力，碰到基因組殘留較多的RNA樣本時，這款逆轉(zhuǎn)錄試劑盒是最you選擇。只需兩步操作，17分鐘就可以完成基因組清除和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，操作方便快捷，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物兼容染料法和探針法qPCR，用于檢測高拷貝或低拷貝基因。

本品采用第三代高效逆轉(zhuǎn)錄酶和熱敏型dsDNase，針對qPCR進行特別優(yōu)化oligo dT和N6隨機引物配比，使cDNA合成可從RNA轉(zhuǎn)錄本的各個區(qū)域起始并具有相同的逆轉(zhuǎn)錄效lv，最da程度保證了qPCR結(jié)果的真實性和可重復(fù)性。

其中5x RT MasterMix為一管式逆轉(zhuǎn)錄預(yù)混液，含有逆轉(zhuǎn)錄所需的所有試劑（Script III Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、RT Buffer）。

注意事項

1． 本產(chǎn)品適用于包含 Ploy (A)結(jié)構(gòu)的真核生物 mRNA 和不包含 Ploy (A)結(jié)構(gòu)的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不適用于miRNA等小 RNA 模板。

2． 避免 RNase 污染。

3． 為保證反轉(zhuǎn)錄成功，建議使用高質(zhì)量的 RNA 樣品。

4． 20μl 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系建議加入不超過 1μg 的 Total RNA。如果目的基因的表達量非常低，最多加入 5μg Total RNA，否則，RNA 量過高，可能會超出后續(xù) qPCR 的線性范圍

5． 建議使用 0.2ml RNase-free PCR 管在冰上配制反應(yīng)液，并用 PCR 擴增儀精準(zhǔn)控溫。

6． 5x RT MasterMix 和 4x gDNA Eraser Mix 含有高濃度甘油，比較粘稠，容易吸附在管壁和吸頭外，導(dǎo)致?lián)p失，用前請點甩離心后取用。5x RT MasterMix 和 4x gDNA Eraser Mix 內(nèi)包含的酶過量，即使每次分別按照 3.8 μl、0.9 μl 使用，也不影響使用效果。

第一連 cDNA 合成 (以 20 μl 反應(yīng)體系為例)

重要提示：操作前，請將各組分輕彈混勻，點甩離心后置冰上備用。

1． 去除基因組DNA

于冰上，在PCR管中，加入以下組分：

用移液器輕輕吸打混勻，42°C 孵育 2 min，以去除基因組 DNA 污染。

2． 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

把步驟1的反應(yīng)管放在冰上，加入4 μl 5x RT MasterMix，輕柔吸打混勻瞬離，設(shè)置反應(yīng)程序：

① mRNA模板來源于真核細胞(植物、動物)，含有Poly(A)尾結(jié)構(gòu)：42℃孵育15min；

② mRNA模板來源于原核細胞(細菌)、病毒，不含Poly(A)尾結(jié)構(gòu)：25℃孵育10min；42℃孵育15 min。

注意：如果模板具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)或高GC區(qū)域，把42°C的孵育溫度提升至50°C，有助于提高產(chǎn)量。

3． 終止反應(yīng)

85°C加熱5 sec，失活RTase和gDNA Eraser。

逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于qPCR反應(yīng)，或保存于-20°C，并在半年內(nèi)使用；長期存放，請分裝后存于-70°C。

qPCR

建議取1~2μl cDNA產(chǎn)物原液作為20μl qPCR反應(yīng)體系的模板。如果基因表達量比較高，請根據(jù)實際情況適當(dāng)稀釋cDNA模板后使用。

相關(guān)產(chǎn)品：

91011 RNAzol Reagent（Trizol）

91013 通用型總RNA快速提取試劑盒（動物、植物、細菌、真菌、酵母）

91218 動物組織/細胞/昆蟲總RNA提取試劑盒 (同RNeasy Plus Mini Kit)

91318 多糖多酚植物總RNA提取試劑盒（RNeasy Plant Mini Kit的升級版)

91451 高效動物組織/細胞總RNA提取試劑盒 (動物組織、細胞)

91452 高效植物總RNA提取試劑盒（根、莖、葉、花）

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