牛羊O型口蹄疫抗體ELISA抗體檢測試劑盒說明書

牛羊O型口蹄疫抗體ELISA 抗體檢測試劑盒說明書

【名  稱】

通用名： 牛羊O型口蹄疫抗體 ELISA 抗體檢測試劑盒

拼 音：kou ti yi bing du O xing jing zheng ELISA kang ti jian ce shiji he

【原  理】

本品系由包被口蹄疫 O 型 VP1 重組抗原和口蹄疫O型VP1 蛋白單克 隆抗體及其他試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫競爭法原理（ELISA） 檢測豬血清 及牛、羊血清中口蹄疫病毒 O 型抗體。

【使用意義】

牛羊O型口蹄疫抗體 ELISA 抗體檢測試劑盒用于檢測豬血清及牛、羊 血清中口蹄疫病毒 O 型抗體。

【試劑盒組成】

【樣品制備】

取動物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。

【洗滌液配制】

使用前，20×濃縮洗滌液應(yīng)恢復(fù)至室溫（25℃左右） ，并搖動使沉淀的鹽 溶解，然后用蒸餾水或去離子水作 20 倍稀釋（例如：用 20mL 濃縮液加 上 380mL 水），稀

釋好的洗滌液在 4℃可以存放 15 天。

【樣品稀釋】

待檢血清 5 倍稀釋：具體為在血清稀釋板中按 5 倍稀釋待檢血清（80μL 樣 品稀釋液中加 20μL 待檢血清，混勻即可）。

注意：陽性對照血清和陰性對照血清不用稀釋。

【使用方法】

1. 使用前將試劑盒置于室溫 30 分鐘，待其恢復(fù)至室溫。(注： 陰、陽對照 血清不用回溫，從 4℃取出，即可使用，使用后立即放回4℃保存)

2. 取所需用量的 FMDV-O 抗原包被板條，設(shè)陰性及陽性對照各 2 孔，未用 的板條盡快密封，2~8℃保存。

3. 陰性、陽性對照孔分別加入陰性、 陽性對照血清 50μL；樣品孔每孔加 入稀釋后的血清樣本 50μL ，然后每孔加入酶標(biāo)記物 50μL。

4. 輕微振蕩混勻；蓋上封板膜封板，置于 37℃環(huán)境避光反應(yīng) 30 分鐘。

5. 洗板：小心揭開封板膜，將孔內(nèi)液體甩干，加洗滌液 300μL/孔，無需靜 置，棄去液體，充分洗滌 4~5 次，最后一次用吸水紙拍干。

6. 顯色：每孔先各加入底物 A 液 50μL ，再各加入底物 B 液 50μL ，輕輕振 蕩混勻，并在 37℃下避光反應(yīng) 15 分鐘。

7. 讀數(shù)： 每孔各加 50μL 終止液，在酶標(biāo)儀于 450nm 處測定 OD 值（在 5 分鐘內(nèi)讀完數(shù)據(jù)）。

【結(jié)果判定】

成立條件：

陰性對照： 陰性對照孔 OD 均值≥ 0.5；

陽性對照：陽性對照孔 OD 均 值≤0.2 ，或陽性對照阻斷率在 80%以上；

計算方法：阻斷率（PI）=（陰性對照 OD 值均值-樣品OD 值）/ 陰性對照 OD 值均值×100%

結(jié)果判定：樣品阻斷率＜30% ，判為口蹄疫病毒 O 型抗體陰性；樣品阻斷 率≥30% ，判為口蹄疫病毒 O 型抗體陽性。

豬血清效價判定：

牛、羊血清效價判定：

【注意事項】

1. 操作時必須戴手套，穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。

2. 采集血清時應(yīng)無菌操作，要求血清清亮無溶血，避免使用嚴(yán)重溶血的血 清。

3. 用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮血清保存時間不能太久，血清解凍后應(yīng)該充 分混勻，血清稀釋后在加樣前也要混合均勻，解凍后的血清爭取一次性 檢測完畢，如需做多次檢測，建議少量分裝冷凍保存。

4. 若血清出現(xiàn)渾濁或沉淀，建議離心后取上清檢測。

5. 試驗結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

6. 試驗中常用到的酶標(biāo)儀、加樣器、洗板機(jī)、恒溫箱及存放試劑的冰箱等 儀器設(shè)備要定期維護(hù)和校準(zhǔn)，確保儀器設(shè)備正常使用，避免試驗誤差。

7. 所有樣品洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

8. 微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可，未用完 的微孔板須放入有干燥劑的密封袋中保存。

9. 剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng) 121℃高壓蒸汽滅菌 30 分鐘，或用 5.0g/L 次氯酸 鈉等消毒劑處理 30 分鐘后廢棄。

10. 不同批號試劑組分不得混用。

【貯藏與有效期】

2~8℃保存，有效期為 12 個月。

溫馨提示：抗原包被板真空包裝袋若有漏氣，抗原包被板仍然正常有效， 不影響實驗結(jié)果，請放心使用。

  僅供科研使用